摘要:目的克隆Ang-1基因,构建Ang-1/Pshuttle/Padeasy-1腺病毒表达载体,为进一步研究Ang-1防治卵巢癌病变的血管异质性提供理论基础。方法提取流产胎儿肝脏组织总RNA,RT—PCR扩增出Anal基因片段,并将其克隆到Pshuttle载体中进行序列分析,经PacⅠ线性化、连接到腺病毒表达载体Padeasy-1中,将Padeasy-1包装进脂质体、转染入人胚肾293细胞,测定病毒生物活性滴度。结果从流产胎儿肝脏组织总RNA中,扩增出1.4kb的cDN段,成功构建了Padeasy-1/Pshuttle/Ang-1表达载体。结论从流产胎儿肝脏组织中成功克隆Ang-1基因,成功构建Padeasy-1/Pshuttle/Ang-1表达载体,Padeasy-1/Pshuttle/Ang-1表达载体的滴度为1×10^11PFU/mL。
关键词:腺病毒载体 基因克隆
单位:第三军医大学西南医院妇产科 重庆400038
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