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人β淀粉样蛋白1-42在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

熊坤林 杨清武 熊任平 重庆医学 2010年第03期

摘要:目的在大肠杆菌中表达人源性β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42),纯化表达蛋白并进行Western blot鉴定。方法根据Gen Bank中人源性Aβ1-42编码序列,分为3个片段人工合成,经退火延伸为全长dsDNA序列,酶切后连接至表达质粒pET-28a(+)构建为重组质粒pET-28a-Aβ1-42,转化至大肠杆菌BL21株中,筛选高表达株,诱导表达,利用Ni+株亲和纯化表达蛋白,SDS-PAGE后,转印PVDF膜,进行Western blot鉴定。结果获得纯化的大肠杆菌表达蛋白Aβ1-42,表达形式为包涵体,经Western blot鉴定为人源性Aβ1-42蛋白。结论本研究获得了纯化的Aβ1-42蛋白,为下一步采用Aβ1-42标记该蛋白作为诊断分子奠定了基础。

关键词:阿尔茨海默病蛋白表达

单位:第三军医大学大坪医院放射科 重庆400042 第三军医大学大坪医院神经内科 重庆400042 野战外科研究所第六研究室 重庆400042

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