摘要：目的克隆肝型脂肪酸结合蛋白（LFABP）基因,构建其原核表达载体,并进行表达、纯化及鉴定。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法从cDNA中扩增出LFABP基因片段,通过酶切和连接,构建原核表达载体pET-m-LFABP,转化入E.ColiBL21（DE3）,经IPTG诱导表达;应用亲和层析、凝胶过滤层析和Lipidex1000凝胶层析分级纯化目的蛋白。圆二色谱分析检测目的蛋白的二级结构和热稳定性。结果 SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量约为15×103,与理论值相一致;应用亲和层析、凝胶过滤层析和Lipidex1000凝胶层析分级纯化目的蛋白,得到纯度较高的蛋白。蛋白的圆二色谱分析表明在大肠杆菌中表达的LFABP蛋白可以形成正确的折叠,热稳定性检测结果表明LFABP蛋白在高温下具有较高的稳定性。结论利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究脂肪酸结合蛋白LFABP的生物学特性、参与脂肪酸代谢调控及其机制研究、与药物的相互作用提供重要基础和研究依据,并将为相关疾病的治疗奠定基础。

关键词：肝型脂肪酸结合蛋白 原核表达 纯化 

单位：河南城建学院生物工程系 河南平顶山467044