摘要：目的包装负载人端粒酶逆转录酶（hTERT）调控相关miR-138前体全长cDNA（pre-miR-138）的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-miR138）。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒（pDC315-miR138）,与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞（HEK293）,包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs（microRNAs）在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。

关键词：rna指导的dna聚合酶 微rnas 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体 

单位：解放军第三二四医院消化内科 重庆400020