摘要：目的构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因（DNA polymeraseβ,polβ）的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达。方法根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物（引物1、引物2）,通过PCR扩增获得含BamHⅠ和ApaⅠ的基因序列,将其克隆入T载体,PCR及测序鉴定无误后,将其插入真核表达载体pcD-NA4-C,从而构建了含突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ。将重组质粒以脂质体包裹的方式转染入polβ基因敲除的EC 9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。结果经过PCR筛选及DNA测序鉴定,证实真核表达载体pcDNA4-C-polβ构建成功。筛选后的EC 9706细胞经HislinkTM蛋白纯化试剂盒纯化,仅在39kD位置有一条带,证明蛋白表达及纯化成功。结论成功构建了食管癌突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,并纯化出polβ蛋白,为进一步研究polβ的功能奠定坚实的基础。

关键词：ec9706细胞 

单位：漯河医学高等专科学校病理生理学教研室 河南漯河462002 漯河医学高等专科学校微生物学与免疫学教研室 河南漯河462002 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室 郑州450001 郑州大学基础医学院病理生理学教研室 郑州450001