摘要:目的研究干扰素调节因子4结合蛋白(IBP)的表达抑制对人乳腺癌MDA—MB-231细胞中微丝、微管的影响。方法设计并合成针对人IBPmRNA的RNA干扰(RNAi)序列,构建RNAi慢病毒表达载体,与包装质粒共转染人胚肾293FT细胞获得病毒颗粒,以病毒感染MDA—MB-231细胞。采用免疫印迹及实时聚合酶链反应(RT—PCR)确定能有效抑制IBP的RNAi序列,筛选出获得稳定感染的细胞株并进行微丝、微管染色。结果成功构建了IBP特异性的RNAi慢病毒表达载体和对照载体,对MDA—MB-231细胞IBP的沉默效率为69.9%;通过微丝、微管染色证实IBP表达下调后,细胞形态出现明显变化,细胞体增大,丝状伪足减少,片状伪足增多,微管排列紊乱。结论IBP蛋白通过影响微管、微丝的排列而改变MDA—MB-231细胞生物聿行为,
关键词:转染 rna干扰 慢病毒感染 细胞骨架 基因
单位:第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室 重庆400038
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