摘要：目的制备特异性抗组氨酸标签（His—tag）的单克隆抗体（mAb）并进行鉴定。方法以合成的15个组氨酸的多肽耦联牛血清清蛋白（BSA）为抗原免疫Balb／c小鼠，按常规方法进行细胞融合。采用间接酶联免疫吸附试验（ELlSA）筛选阳性克隆及有限稀释法进行克隆化，用ProteinG柱亲和纯化抗体及ELlSA检测纯化抗体的效价、相对亲和力及抗体亚类，用EI。ISA及Western blotting对inAb的特异性进行鉴定，并与含His—tag的重组蛋白特异性抗体配对建立双抗夹心ELlSA定量检测对应的重组蛋白。结果筛选出5株能稳定分泌抗Histag的杂交瘤细胞株，抗体亚类均为IgGl（K），其中1-G2亲和力最高（1．27×10^10），并且1-G2在EI，IsA及Western blotting中能与不同类型的含His—tag的重组蛋白结合，能与降钙素原（PCT）抗体构建双抗夹心EI，ISA定量检测含Histag的PCT重组蛋白，灵敏度达到4．6ng／mL。结论成功制备了特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗His—tag的mAb，该抗体能应用于ELISA及Western blotting等多种His—tag的检测方法，为蛋白质研究检测、定位、相互作用等提供了工具。

关键词：抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定 印迹法 蛋白质 

单位：解放军第八二医院一四九临床部 江苏连云港222042