摘要:目的构建泛醌-细胞色素C还原酶核心蛋白1(UQCRC1)重组腺病毒载体,探讨UQCRC1对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法采用PCR法从cDNA文库钓取UQCRC1基因,经Sa1Ⅰ和XbaⅠ双酶切,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV,将鉴定后的pAdT rack—UQCRC1转化BJ5183菌,筛选阳性克隆后用脂质体介导转染293T细胞,整合包装成重组腺病毒并转染H9c2心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达和uQCRC1基因与蛋白表达;并检测细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH)的释放。结果成功构建了UQCRC1重组腺病毒;UQCRC1过表达能显著增加缺氧/复氧后H9c2心肌细胞的活性(P〈0.05),减少LDH的释放(P〈0.05)。结论UQCRC1对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,其重组腺病毒的构建为进一步研究UQCRC1在心肌保护中的作用及机制奠定了基础。
关键词:重组腺病毒 心肌再灌注损伤 心肌保护 心肌细胞 心脏
单位:第三军医大学新桥医院麻醉科 重庆400037
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