摘要：目的：建立体外联合肝细胞生长因子（HGF）和表皮生长因子（EGF）培养人胆囊上皮细胞（HGBECs）方法。方法先剥离上皮，采用反复Ⅳ型胶原酶消化配合刮取HGBECs，制备成单细胞悬液进行接种，细胞分别接种于含或不含10ng/mLEGF以及含10ng/mLHGF＋10ng/mLEGF的培养基进行原代培养。倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化，细胞计数、噻唑蓝（MTT）法检测HGF＋EGF对HGBECs增殖的影响。结果成功培养HGBECs。添加HGF＋EGF组较添加EGF组HG-BECs增殖速度快且维持时间长；体外存活时间明显延长（19．3±2．5）dvs．（14．2±2．4）d，P＜0．05，细胞活力和细胞形态优于只添加EGF组。结论HGF联合EGF可以明显地促进HGBECs增殖，延长细胞体外存活时间，较长时间稳定细胞形态。

关键词：胆囊 上皮细胞 肝细胞生长因子 表皮生长因子 

单位：昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科二病区 昆明650101