摘要：目的：构建hsa‐miR‐424基因慢病毒表达载体，并鉴定miR‐424在细胞内表达水平，研究hsa‐miR‐424对宫颈癌He‐la细胞增殖的影响。方法以人基因组DNA为模板，设计合成miR‐424的上下游引物，PCR扩增目的片段，回收产物将其连入pMD18T载体中，进行测序。再以pMD18T‐miR424为模板进行PCR扩增，将其中表达pMD18T‐miR424的结构经酶切后插入pLentis‐CMV‐GFP‐MCS‐PGK‐PURO载体，构建成pLentis‐CMV‐GFP‐miR424‐PGK‐PURO，在293T细胞中与pSPAX2、pMD2．G包装产生所需的慢病毒，再用含慢病毒的上清液感染Hela细胞。结果miR‐424基因与慢病毒载体连接成功，测序结果证明了插入到质粒载体中的miR‐424前体序列完全正确，成功构建pLentis‐CMV‐GFP‐miR424重组慢病毒载体，用其感染宫颈癌Hela细胞后上调miR‐424的表达近60倍。采用MTT法检测增殖结果提示：感染miR‐424慢病毒的宫颈癌Hela细胞株均存在细胞增殖减慢。结论成功的构建了miR‐424慢病毒载体，建立了高效稳定表达miR‐424的细胞株，并用含慢病毒的上清液感染宫颈癌Hela细胞，成功抑制了Hela细胞的增殖，为后续相关的研究奠定了良好的基础。

关键词：hela 细胞 细胞增殖 慢病毒表达载体 

单位：第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心 重庆400042