摘要:目的筛选携带抗鼻咽癌质粒pFY的稳定高产菌株。方法以CaCl2法制备大肠杆菌JM109感受态,将抗鼻咽癌质粒pFY转化JM109感受态,对琼脂平板上获得的菌落进行筛选,选出符合标准的单菌落为菌种,进行菌种稳定性实验。用质粒提取试剂盒检测质粒含量。将抗鼻咽癌质粒pFY转染到细胞CNE-2中,四氮唑蓝(MTT)比色法观察转染试剂及质粒载体对细胞生长增殖的影响。结果筛选得到菌株的培养液中质粒DNA含量为30mg/mL,超螺旋DNA比例为92%。经电泳和酶切鉴定,该菌株的50子代所携带质粒与原代一致。质粒pFY对CNE-2细胞株生长有明显的抑制作用。结论成功筛选出携带抗鼻咽癌质粒pFY的稳定高产菌株,为大批量制备临床应用级质粒奠定了基础。
关键词:鼻咽肿瘤 感受态细胞 质粒 转化 筛选
单位:佛山科学技术学院医学院医学检验系 广东佛山528000
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