摘要：目的构建针对mTORC2特异组成蛋白中rictor基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的rictor干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR验证目的基因rictor沉默情况。采用PCR和western blot检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默rictor基因的重组慢病毒并感染A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA水平均有明显下降（P〈0.05）。同时,shRNA-rictor组中rictor和下游SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的蛋白水平较前两组均有明显下降（P〈0.05）。结论沉默rictor基因对mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同时从基因和蛋白水平影响肺泡上皮细胞α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC的表达。mTORC2/SGK1可能是调控肺泡上皮细胞对肺泡液的清除能力,同时影响肺水肿形成的重要信号通路。

关键词：呼吸窘迫综合征 成人 rictor基因 慢病毒属 

单位：重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 400010