摘要：目的分离、培养LEWIS大鼠肝脏肝巨噬细胞（KCs）,观察肌醇酶1-X盒连接蛋白1（IRE1-XBP1）通路活性改变对KCs功能的调控的作用机制。方法 （1）采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离Lewis大鼠KCs;（2）鉴定后的KCs分为4组：XBP1沉默组（XBP1-shRNA组）、错义序列沉默对照组（Ctrl-shRNA组）;Adv-XBP1过表达组（AdV-XBP1组）、错义序列过表达对照组（Ctrl-AdV组）;（3）实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组KCs中XBP1、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17转录水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测JAK1、JAK2、STAT1及STAT3的蛋白表达水平;（4）流式细胞术（FCM）及激光共聚焦检测各组KCs表型的变化情况;（5）分离大鼠脾脏淋巴细胞,尼龙毛柱过滤纯化T细胞,与上述各组KCs共培养,Brdu渗入法检测T细胞增殖情况;（6）Annexin V/PI法FCM观察T淋巴细胞凋亡情况;（7）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上清液中IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17及IL-10水平。结果 （1）RT-PCR结果显示,XBP1-shRNA组中XBP1的表达量较对照组显著降低,而在AdvXBP1组则明显上调（P〈0.05）;（2）FCM发现,XBP1-shRNA组中MHC-Ⅱ、CD86、CD40的表达明显低于对照组,而CD204和CD206的表达则显著高于对照组;而在Adv-XBP1组,则呈相反趋势;（3）Western blot检测发现XBP1-shRNA组中JAK1、JAK2、STAT1和STAT3的蛋白表达及其磷酸化水平均受到抑制,而在Adv-XBP1组则上述蛋白的表达及磷酸化水平得到显著增强;（4）Brdu发现抑制KCs中IRE1-XBP1活性后T细胞增殖受到明显抑制,凋亡增加,促炎细胞因子分泌减少,抗炎细胞因子分泌增加（P〈0.05）,而上调KCs中IRE1-XBP1活性后T细胞增殖则明显增强,凋亡明显减少,促炎细胞因子分泌增加,抗炎细胞因子分泌减少（P〈0.05）。结论 KCs中IRE1-XBP1通路活性变化可以转化KCs的极性状态,并通过调节JAK-STAT家族成员表达,调控KCs自分泌细胞因子的�

关键词：x盒结合蛋白1 肝巨噬细胞 极性调节 

单位：重庆三峡中心医院肝胆外科; 重庆万州404000; 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科; 400010