摘要：目的通过生物信息软件预测出miR-155的靶基因,构建miR-155靶基因荧光素酶基因报告载体,验证其与miR-155的对应关系。方法以数据库miR Base为依据,对miR-155进行生物信息学分析,通过Target Scan、Mir Base、Pic Tar三大软件预测miR-155的靶基因;将设计合成的T淋巴细胞核因子5（NFAT5）及其突变序列NFAT5-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒pMIR-REPORT （TM） Luciferace;将第4代人胚胎肾293AD（HEK-293AD）细胞按随机数字表法分为4组：miR-155mimics＋pMIR-NFAT5组、miR-155 mimics＋pMIR-NFAT5-mu组、miR-155inhibitor＋pMIR-NFAT5组、miR155 Negative control＋pMIR-NFAT5组与对照质粒（pRL-TK）共转染24h后用双荧光素酶检测试剂盒测定相对荧光素酶活性。结果 Mirbase、TargetScan、PicTar预测交叉结果显示,NFAT5基因3′UTR与miR-155存在结合互补位点;构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu重组质粒经酶切及测序鉴定正确;双荧光素酶报告基因检测系统显示：pMIR-NFAT5＋miR155 mimics组较pMIR-NFAT5＋miR-control组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义（P0.05）。结论成功构建pMIR-NFAT5、pMIR-NFAT5-mu荧光素酶报告基因重组质粒;证实miR-155对NFAT5基因mRNA 3′-UTR具有靶向调控作用,为下一步研究miR-155在吸入性肺损伤机制中的作用提供前期实验室数据和方法。

关键词：t淋巴细胞核因子5 荧光素酶基因报告载体 

单位：河北北方学院研究生部; 河北张家口075000; 解放军第三0九医院烧伤整形科; 北京100091