摘要：目的构建Wip1基因重组慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法以慢病毒感染方法将Wip 1的短发夹状RNA（shRNA）转入乳腺癌MCF-7细胞。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）检测转染前后细胞Wip1mRNA、蛋白的表达,MTT法、流式细胞术及Transwell侵袭实验检测Wip1-shRNA对MCF-7细胞增殖、凋亡、周期及侵袭转移的影响。筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子p53dsRNA,并分析其干扰后对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的影响。结果转染48h后,Wip1-shRNA组细胞荧光较强,NC-shRNA组较弱。Wip1-shRNA组细胞Wip1mRNA和蛋白的表达分别为0.291±0.025、0.203±0.021与NC-shRNA组0.954±0.090、0.963±0.092比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组各时间点细胞存活率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。NC-shRNA组早期与晚期细胞的凋亡数少于Wip1-shRNA组,差异有统计学意义（P〈0.05）。NC-shRNA组细胞G0＋G1期、S期细胞数分别为53.5±3.6、27.3±1.5,Wip1-shRNA组分别为72.3±5.2、14.6±0.8,差异有统计学意义（P〈0.05）。Transwell侵袭转移结果表明,NC-shRNA组细胞的穿膜数均多于Wip1-shRNA组（P〈0.05）。对照组细胞中p53mRNA的表达、细胞侵袭转移的穿膜数与p53dsRNA组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 RNA干扰可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞Wip1表达,Wip1可能通过调控蛋白表达影响乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期与侵袭转移,p53dsRNA干扰p53基因下调后增加乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移的能力。

关键词：wip1 乳腺肿瘤 细胞凋亡 基因转染 

单位：河北省唐山市工人医院乳腺外科; 063000; 河北省唐山市妇幼保健院妇产科; 063000; 河北省唐山市人民医院放化疗科; 063000