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重组SSB蛋白表达、鉴定及评价

杜琴; 卢小岚; 王强; 汪光蓉; 罗文依; 王舒琪; 姚丽华; 张国元; 刘剑平; 王东生 重庆医学 2019年第14期

摘要:目的构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化。方法以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamHⅠ和XhoⅠ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*His-pet41a重组表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌OverExpress C41(DE3)中,经异丙基β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用C端的His标签(Histag)进行Ni-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达形式,蛋白印迹法(WB)鉴定重组蛋白的免疫原性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和特异性。结果 PCR扩增获得目的基因,菌落PCR示重组表达质粒构建成功,转化感受态OverExpress C41(DE3)后经诱导有高效表达,SDS-PAGE显示GST-SSB-6*His重组蛋白为上清可溶性表达,WB示重组蛋白有足够的免疫原性,能与外周血中的抗SSB抗体发生特异性反应,特异性达100%。结论成功构建了GST-SSB-6*His-PET41a重组表达质粒,经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步建立应用于国产仪器的全自动定量检测抗SSB自身抗体的磁微粒化学发光试剂,奠定了基础。

关键词:ssb重组质粒蛋白表达蛋白鉴定

单位:川北医学院附属医院检验科; 四川南充637000; 川北医学院医学检验系; 四川南充637000; 川北医学院医学转化医学研究中心; 四川南充637000; 川北医学院附属医院医学风湿免疫科; 四川南充637000

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