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甘蓝自交不亲和信号传导中THL1和SRK相互作用的体外检测

高启国; 宋明; 牛义; 杨昆; 朱利泉; 王小佳 作物学报 2008年第06期

摘要:在甘蓝自交不亲和信号传导中SRK和THL1之间可能存在相互作用。为进一步证实该相互作用,以甘蓝E1为材料,采用RT-PCR技术扩增了THL1和SRK激酶结构域(记为SRKE1)编码序列,构建了THL1原核表达质粒pET43.1-THL1,SRKE1原核表达质粒pET431-SRKE1和真核表达质粒pPIC9K-SRKE1,分别在宿主菌大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中进行表达。THL1融合蛋白经胰岛素检测,表明表达的THL1有氧化还原活性。建立了体外检测蛋白质相互作用的新方法,并用该方法对THL1与SRKE1的相互作用进行了检测,结果表明THL1可与SRKE1相互作用并形成稳定的复合体,这为深入分析THL1与SRK相互作用机理提供了理论和技术基础。

关键词:类硫氧还蛋白毕赤酵母

单位:西南大学重庆市蔬菜学重点实验室; 重庆400716; 西南大学植物生理生物化学实验室; 重庆400716

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