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用磁珠富集法分离亚麻基因组微卫星分子标记

邓欣; 陈信波; 龙松华; 王孝纯; 高原; 何东锋; 王进; 王玉富 作物学报 2008年第12期

摘要:应用Dynal磁珠一生物素标记的微卫星探针(CT)15与亚麻基因组DNA酶切片段杂交,捕获300~1500bp含有微卫星序列的DN段,连接到pMD18.T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库。利用接头引物和根据微卫星核心序列设计的引物VRV(CT)15使用PCR方法直接对文库筛选,从422个转化子中获得了104个阳性克隆,对其进行测序分析,获得了97个微卫星序列,微卫星序列的富集效率达到22.99%,PCR扩增筛选效率93.27%。对97个微卫星序列进行比对分析,其中51个重复序列的两端序列高度相似,据其设计的特异引物对阳性克隆进行2次筛选,能淘汰相似度高的同类序列,提高筛选亚麻微卫星标记的效率。

关键词:亚麻微卫星磁珠富集

单位:中国农业科学院麻类研究所/农业部麻类遗传改良与工程微生物重点实验室; 湖南长沙410205; 湖南农业大学/作物基因工程湖南省重点实验室; 湖南长沙410128; 黑龙江大学资源与环境研究室; 黑龙江哈尔滨150080

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