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高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法

王慧娜; 初志战; 马兴亮; 李日清; 刘耀光 作物学报 2013年第07期

摘要:制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4mm或3mm的合金珠和150μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2~4min破碎组织。此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2~4ngμL^-1。用96针复制器或多通道移液器转移约0.5~1.0μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测。此方法制备的gDNA模板也适合于较大DN段(〉1kb)的扩增。本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果。这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测。

关键词:基因组dna制备pcr基因分型

单位:亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/华南农业大学生命科学学院; 广东广州510642

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