摘要：以棉花幼嫩子叶为材料，分析影响棉花叶肉原生质体分离及目标基因转化的主要因素，以棉花叶肉原生质体为受体，建立了稳定、高效的目标基因瞬时表达与鉴定体系。技术体系包括，选择自然生长12d的棉花幼嫩子叶为材料，混合1．5％纤维素酶、0．4％离析酶、0．5molL^-1甘露醇、20mmolL～KCI、20mmolL^-1MES、0．1molL^-1CaCl2和1．0gL^-1BSA，在28℃黑暗条件下振荡酶解8h，可游离出浓度达1．0×10^6mL。以上的纯净棉花叶肉原生质体。利用该方法将棉花锌指蛋白基因GhZFP2整合到pJIT166-GFP质粒载体，构建了GhZEP2：GFP融合载体，采用40％PEG-4000介导转化，获得高转化率的棉花叶肉原生质体。对目标基因瞬时表达产物检测表明，GhZFP2蛋白清晰定位在细胞核上。

关键词：棉花 原生质体 peg介导 转化 目标基因 

单位：南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/教育部杂交棉创制工程研究中心; 江苏南京210095