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簇毛麦新型HMW-GS的序列分析及加工品质效应鉴定

杨华; 高翔; 陈其皎; 赵万春; 董剑; 李晓燕 作物学报 2014年第04期

摘要:利用设计的HMW-GS特异引物,从簇毛麦TA10220中克隆到6条HMW-GS基因序列(1.0~1.7kb,GenBank登录号为KF887414~KF887419),比普通小麦HMW-GS基因序列小,其中KF887414~KF887417为能正常表达的基因,KF887418和KF887419是编码区出现终止信号的假基因。综合推导氨基酸的序列分析以及基于编码蛋白全序列、N-端和C-端域的进化树分析,认为KF887414属于Y型HMW-GS,KF887415-KF887419的氨基酸序列同时具有X和Y型的结构特征。将具有完整编码区的4个基因在宿主菌Escherichia coli Rosetta—gamiB(DE3)中经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析表达的蛋白质和种子提取的HMW-GS,经Westernblot进一步检测表达产物,证明蛋白质表达成功。通过His-TrapHP柱纯化表达蛋白,回收产物经SDS—PAGE分析后,低温冷冻干燥备用。将冷冻干燥的回收产物加入中国春基础面粉中,利用微量掺粉试验通过测定粉质参数来鉴定簇毛麦来源的HMW-GS对面粉品质的影响,结果表明,簇毛麦来源的4个HMW-GS对于面粉加工品质具有显著的正向效应。

关键词:簇毛麦高分子量谷蛋白亚基原核表达掺粉实验

单位:西北农林科技大学农学院; 陕西杨凌712100; 陕西省小麦工程技术研究中心/陕西省小麦新品种培育研究中心; 陕西杨凌712100

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