摘要:以两种野生型发根农杆菌菌株、三种共培养培养基和六种外植体为试材,建立了茶树发根高频诱导体系,最高发根诱导频率达30%以上。最佳发根诱导体系为:OD600为0.5-0.8的发根农杆菌菌液侵染已培养60-70d苗龄无菌苗茎段10-50min,在添加100mmol/L乙酰丁香酮的YMB固体培养基上共培养2d,在含500mg/L头胞噻肟钠的MS培养基上诱导发根。发根在不含激素的LG0培养基上生长迅速,产生大量侧枝和根毛。PCR证实,发根农杆菌Ri质粒T.DNA的rolA、rolB和roIC基因已经插入到发根基因组DNA中。应用此发根诱导体系,以含携带Bt基因的双元载体质粒pCAMBIA2301的发根农杆菌15834,侵染茶树外植体诱导出发根,PCR和GUS组织化学染色证实外源基因已经插入到基因组DNA中并获得表达。
关键词:茶树 发根农杆菌 发根培养 遗传转化
单位:浙江大学茶学系; 浙江杭州310029; 江苏省徐州生物工程学校; 江苏徐州221006
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