摘要:EcoTILLING (Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)可快速检测自然群体中的SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等DNA变异。第一次建立了简化的茶树EcoTILLING技术体系:首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物;然后通过CELI酶切PCR产物优化实验,确定酶切时间20min、10×buffer组成为250mmol/L Tris-HCI(pH7.4)、150mmol/LKCI、15mmol/LMgSO4、4lag/mLBSA和0.04%Triton x-100,反应温度为47.5℃,酶量为1.8μL CJE(Celery Juice Extract)/10μL反应体系时,酶切的谱带信号较强、特异性高;初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5%、上样量4~5μL、有效分离长度要达到15cm。利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870bp的PPO基因片段实现了分型,经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合。
关键词:茶树 ecotilling snp
单位:中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心/国家茶树改良中心 浙江杭州310008
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