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茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化

骆洋 王弘雪 王云生 卢忠尉 刘亚军 单育 陈啸天 叶辉 高丽萍 夏涛 茶叶科学 2011年第04期

摘要:茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37 kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白。HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性。

关键词:茶树花青素还原酶原核表达酶活性

单位:安徽农业大学生命科学学院 安徽农业大学教育部茶叶生物化学与生物技术重点实验室

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