时间：2023-02-28 15:32:57
绪论：在寻找写作灵感吗？爱发表网为您精选了8篇班组学习计划，愿这些内容能够启迪您的思维，激发您的创作热情，欢迎您的阅读与分享！
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二、学习内容：
A、理论文章学习_—_—
1、《整合课程生成发展活动的几种类型》
2、《让生成活动充满教育智慧》
B、生成活动教育案例学习
《做人好还是做动物好》
C、现场讨论：生成活动的途径有哪些？怎样有效开展生成活动？什么样的问题具有生成价值等等问题
三、学习目的：
丰富理论经验，通过理论学习，以在自身实践的整合课程中，能更好地实施生成活动。
四、学习流程：
1、年级组长引言：
2、理论文章学习一：《整合课程生成发展活动的几种类型》
3、年级组长小结：
由于教师群体和儿童群体均存在极大差异，所以同样的课程内容在不同地区、不同幼儿园和不同班级实施都会产生较大差别。我们教师在摁扣成实施过程中与不断互动，共同成为发展课程的主体。幼儿和教师互动生成的课程大致可以分成三种类型：生成发展的课程活动；生成发展的课程线索；生成发展的课程主题。幼儿园的是横成发展受到儿童兴趣、儿童经验、教师倾向和家长资源等因素的影响。总之，生成活动是在师幼互动中完成的。
4、学习理论文章二：《让生成活动充满教育智慧》
学习后获得，如果将生成活动视为探究问题的过程，我们可以将生成途径分为几种：一是寻找有争议的问题；二是寻找感兴趣的问题；三是寻找幼儿发展过程中存在的问题；四是寻找原有教材中经验缺失的问题。
5、生成活动教育案例学习：《做人好还是做动物好》
6、现场讨论：
生成活动的途径有哪些？怎样有效开展生成活动？什么样的问题具有生成价值等等问题
五、摘录教师发言：
生成课程对教师有较高要求，首先教师要是一个细心的观察者，要善于发现，并抓住幼儿反馈的信息。其次教师要是一个策划组织者，将抓住的来源于幼儿的信息进行归类与整理，再返回给幼儿，并组织幼儿进行讨论，协助幼儿形成辐射图。最后教师还是一个幼儿经验的提升者，将幼儿讨论的内容充实，进一步提升，让生成课程完整而有意义。
以前在我们的意识里，认为在实施的教育教学中，只要将教材里预设的课程上完就可以了，认为生成课程比较难，对怎样生成新的课程，到哪里生成新的内容等问题都比较模糊，所以在活动中生成的新内容很少。但随着对课程的不断研究，我们在观念上对生成课程引起了重视，也逐渐地对生成课程有了进一步的理解与认识，所以在教学时间中很多老师能够从幼儿的兴趣点或幼儿的现有经验等途径出发，也派生了一些生成课程。我认为在课程实施过程中，我们教师最重要的是要作好整理和展示的工作，这才是课程开展的价值所在。
通过学习使我知道了其实生成课程的途径有很多，在幼儿园里我们往往抓住幼儿的兴趣点或由是幼儿在活动中引发的讨论话题而展开新的生成活动。书中讲的由幼儿园迁移到家庭中的学习，给我很大的启发。（是的，这个例子在我们班级就产生过，刘插话）最后还从家庭到全园展开的学习，这就进一步拓展了课程开展的范围，以后我们就应该这样去做。
课程的生成是孩子和老师的互动中对活动的再次延伸，是幼儿在经过讨论、研究的基础上，挖掘新的知识点，从而提高幼儿的探索兴趣，使他们获得更丰富的学习经验。在生成的活动中，不仅体现了幼儿的智慧，同时也充分地展示了教师的智慧。在探索生成课程的过程中，教师对生成课程的内容、价值、途径等作了深入的思考，所以在这样的活动中，也使我们教师迅速成长起来。
我们要留心就会发现身边许多值得幼儿探索研究的问题，于是就产生了有价值的生成课程内容。只要我们把握活动的目标和教育价值，兼顾幼儿的年龄特点、兴趣和经验等因素，寻找可以利用的资源，思考恰当的活动方式，就可以与幼儿互动生成更多的活动。
我觉得只要我们认真倾听幼儿的每一句话语，在幼儿的语言中也可以生成新的内容，我想这就是在倾听中生成的活动。所以我觉得我们应该抓住幼儿的话题作为探讨的内容生成内容，也是一个很好的方法。
在我们开展的“各行各业”主题活动中，我们发现孩子们对老师预设的课程内容十分感动兴趣。根据幼儿的兴趣点，我们适时给幼儿提出一些问题，引发幼儿思考与讨论，让他们在讨论中积累更多的经验。老师做好一个生成活动的鼓励者。
关键词：班级文化 小组建设
开展“导学达标”课改活动以来，按照学校部署，我很快将同学们分成了10个小组，但是结合自己以往小组教学的体会，小组内必须形成较强的凝聚力，若没有凝聚力作支撑，小组竞争就无法实现，没有了竞争，合作探究也就没有了动力，时间一长，课堂效率就会大打折扣。
如何加强小组凝聚力？我从学校的课改实施方案上得到了启示，那就是加大班级和小组文化氛围，落实好小组合作学习的文化建设。当然，这不能靠班主任自己去完成，必须要激发同学们自主参与的的积极性。
我以班训“抬头靠实力，低头靠勇气”为题，在班会上进行了一次专题演讲，请同学说出对这句话的理解，同时，我也加入其中，详细阐述自己喜欢这句话的原因和意图，渲染出浓厚的氛围之后，我提出要求：我们各小组也需要自己的文化，所以每个小组也应当有自己的组名，组规和组训，我们班是一个大家庭，就都以水果为名，希望各小组能群策群力，起一个成员们都喜欢，又能充分体现小组个性的组名。
结果超出我的想象，同学们对起“组名”非常上心，仅仅一天功夫，十个水果小组就确定了下来。更没想到，他们能将给自己的组名诠释的如此精彩！在为此召开的主题班会上，各小组发言人的演讲精彩不断，让我这个英语老师对这些七年级的孩子刮目相看！ “芒果”是神圣果，芒果组的成员是不可战胜的，因此把To be No.1！作为组训；蓝莓与天空一样的颜色，蓝莓组同学要胸怀宽广，不对小事斤斤计较；榴莲那么臭竟然还有人喜欢，说明他一定有过人之处，榴莲小组决定要注重内在品质修养；荔枝组同学欣赏荔枝外形不美但内心高贵；山楂组希望八位同学能串成糖葫芦，精诚团结；班内倒数第一名在菠萝组，几位成员决定把“克服屡战屡败的唯一方法是屡败屡战”作为组训…，虽然言语有些稚嫩，但想想出自七年级小孩之口，让人不由得刮目相看！
接下来的工作就简单多了，组长分工设计，组员们各显本领，第一期“小组墙报”很快就张贴完毕，其中包括了组名诠释，组训组规，小组分工，以及部分组员的作品展示，香橙小组还创造性地设计出了自己的组徽，得到了广泛好评。
以前总感觉这些工作很费事儿，可这次体会到，一旦学生的积极性得以调动了，我们只需要指点几句就可以了，根本没有想象的那么复杂。学生们课间里忙着设计、张贴，自然就少了追逐打闹，也少了许多纠纷；各小组自发地进行评比，一个个不甘落后，无形之中，各小组的凝聚力和竞争意识也已经形成。我发现，现在对某件事情进行总结，只要一提“山楂组打扫卫生不够及时”，八个人会立刻做出反应，抢着去拿劳动工具。我想，这种可贵的意识延续到课上，小组互相帮扶、合作探究、检查督促等环节自然就有了许多实质性的内容。
【关键词】小学数学 大班额环境 小组合作学习 评价
数学课程标准指出：“学生是数学学习的主人，教师是数学学习的组织者、引导者和合作者。”小组合作学习是当今小学数学课堂教学中较流行的课堂组织形式。如果一个班级人数过多，无疑会给小组合作学习带来一定的困难。教师如果调控不好，小组合作就会处于一种缺乏监控与指导的散乱状态。多元化的评价机制对小组合作学习是非常重要的。在大班额环境下，笔者对小学数学课堂的小组合作学习经常采用以下评价策略。
一、合作学习中的小组自我评价
小组自我评价能够为小组的合作提供有益的反馈，是合作学习的一个极其重要的环节。令人担忧的是，在实际的合作学习实践中，由于时间紧迫，不少数学教师轻视甚至忽视了小组自评这个环节，从而影响了合作学习的效果。自我评价的对象是某一活动时期内，哪些组员的活动有益与无益，哪些活动可以继续开展或需要改进，其目的是帮助小组学生学会更好地合作。
小组自我评价可以从三方面着手：第一，总结有益的经验；第二，明确发展的方向和目标；第三，在总结经验和分析问题的基础上，共同制定出本组今后的活动方案，明确如何达到目标。具体操作为：组长准备好记录本，一节课一考评，一天一统计，一周一加星，用“正”字统计组内成员一天参与小组合作学习情况，五个“正”字换一朵红花，五朵红花换一颗星。考评分五项：①课堂发言，发言一次加一笔，得到老师表扬加一笔，发言错误不加；②课堂展示，展示一次加一笔，有解题方法的总结或得到老师的表扬加1笔，错误不加；③组内讨论，积极参与组内讨论的加一笔，表现突出的加两笔，不积极的不加；④完成任务，分配的学习任务及时完成的加1笔，不及时的不加；⑤违纪，在小组学习过程中，讨论和问题无关的，注意力不集中的，纪律差的，每次扣除一笔，老师批评的扣两笔。一节课结束后组长要及时记录，一天结束后要组织选出最活跃和最不活跃的学生各一名，表现最好但纪律最差的不能当选最活跃或者最优秀学生。组长每周总结经验，找出本组学习问题，确定努力方向，并给当选学生家长打电话报喜或者写喜讯，同时取得问题生家长的支持。期末结束时，对于学生获星星颗数在10颗至20颗之间的，教师在全班表扬，并评为“班级合作学习之星”；对于获得20颗以上的学生由教师上报学校当选为“学校合作学习明星”，在校园内公示，颁发奖状。这种自我评价能够维持小组成员间良好的关系，便于学生形成合作学习的技能，使学生对自己的参与情况有所了解，强化小组成员的积极行为和小组合作成功的概率。
二、合作学习中的教师评价
在学生进行合作学习时，教师要及时反馈，评价、激励、评价时需要把握以下几点。
（一）评价要把学习过程与学习结果结合起来，侧重于对过程的评价，要体现“不求人人成功，但求人人进步”的理念。如果只对小组活动的结果作评价，忽视小组活动过程中各成员的参与程度、角色分工及协调配合、参与活动的意识与积极性等评价，就会出现学生在小组活动中称霸或不参与合作等不良现象，也容易使一些成员在小组活动中处于边缘地带，游离于小组活动之外。
例如我在教学一年级数学下册《整十数加、减整十数》例1时，提问：“想一想40+30等于多少？怎样算出来呢？自己思考，然后说给小组内的成员听一听。”
师：哪个小组来给大家汇报一下你们组的学习成果？
生1：我们组是这样算出来的，4+3=7，7后面添个0，就是70。
师：为什么要添个0？（生1站在那里，眼睛盯着自己的作业本，支支吾吾，半天说不出来。）
师：组内的其他成员帮帮他？
生2：我来。
师：好，你们组真棒！
……
师：你看，你们组的这几位同学讨论得多好啊！就少了你一个人没参与，多可惜。
【关键词】慢阻肺伴呼吸衰竭；雾化吸入；血氧饱和度；影响及对策
文章编号：1004-7484（2013）-11-6378-01
慢阻肺（COPD）是常见的呼吸系统疾病，并已列入当前六大慢性非传染性疾病之一，随着肺功能损害的逐渐加重，COPD患者常出现慢性呼吸衰竭，并进一步引起动脉高压、慢性肺原性心脏病，重度COPD患者还易合并气胸、肺栓塞，并常伴有身体疲劳、体重下降等，全身各个器官均有不同程度的损害，这种损害是不可逆的，因此临床需要采取各类措施来减轻症状、改善生活质量、减少急性加重以及延缓肺功能下降。近年来我院除常规的临床治疗措施外，利用雾化吸入良好的气道湿化、给药及消炎作用进行治疗，而实践中我们发现慢阻肺伴呼吸衰竭患者在雾化吸入过程中往往出现胸闷、气短等不适症状，并且血氧饱和度也呈不程度的下降，有的患者甚至不能坚持而影响整个疾病的治疗进程。对此我们进行相关分析，并在临床实践中提出针对性的对策处置措施，以便使患者更好地进行治疗，下面就此措施的应用及体会分析报告如下：1资料和方法
1.1一般资料选取我院2009年1月至2011年12月32例慢阻肺伴呼吸衰竭患者为观察研究对象，其中男性20例，女性12例，年龄48至66岁，平均57岁，弥漫性肺气肿21例，局限性肺气肿11例，所有患者均伴有Ⅱ型呼吸衰竭。雾化吸入用药为生理盐水20ml+α-糜蛋白酶10mg十庆大霉素8-16万U+沐舒坦30mg，吸入时间20分钟/次；雾流量为1-3ml/min，在雾化吸入过程中均进行动脉血氧饱和度（SaO2）检测，患者均比治疗前明显降低。
1.2疾病概述慢阻肺基本病理环节是小气道阻塞，达到一定程度时即引起缺氧，往往伴有二氧化碳潴留，可造成Ⅱ型呼吸衰竭，Ⅰ型呼吸衰竭为单纯缺氧所致，肺气肿早期可出现，气道阻塞后造成肺通气不足，进而出现低氧血症，使动脉血氧分压（PaO2），动脉血氧饱和度（SaO2）以及动脉血氧含量（CaO2）下降，然后造成组织缺氧。临床主要症状为呼吸困难加重、脉搏、心率加快、焦虑、烦躁，急性期患者还可见口唇、指甲变紫。
1.3血氧饱和度概述血氧饱和度（SO2）是血液中被氧结合的氧合血红蛋白（HbO2）的容量占全部可结合的血红蛋白（Hb）容量的百分比，即血液中血氧的浓度，是呼吸循环的重要生理参数。监测动脉血氧饱和度（SaO2）可以对肺的氧合和血红蛋白携氧能力进行估计。
1.4方法我们对慢阻肺伴呼吸衰竭患者进行雾化吸入致血氧饱和度下降的现象施行针对性的处置措施，具体为：
1.4.1疾病及治疗宣教对患者进行健康教育，了解雾化吸入的原理及相关配合措施，进行心理引导，消除不良情绪，严禁患者及其家属擅自调大雾流量，延长雾化吸入时间，告知患者不可停止吸氧，采用渐进调节雾化量的吸入方法，从小雾量、低湿度开始。
1.4.2相关护理对策仔细评估其病情，吸入过程中应密切观察患者的病情变化，采用仰卧位吸入治疗，症状较轻、咳痰有力者采用半坐卧位，意识模糊、咳嗽无力者则取侧卧位。出现胸闷、气短等，应随时减少雾流量或采用间歇吸入法，吸入过程中适当加大氧流量，氧浓度可提高到4-6L/min，待动脉血氧饱和度恢复至吸入前水平时，再调回原吸氧浓度，雾化吸入过程中注意排痰，给予拍背，起到持续振动的目的，利于痰液排出。利用空歇期对患者进行心理疏导，消除不良情绪，放松呼吸肌。
1.4.3雾化设备及雾化用药调整使用空气压缩泵雾化吸入，减少心率、呼吸和血压变化的不良反应，或使用氧气驱动雾化吸入，雾化器内加硫酸沙丁胺醇雾化溶液1ml
1.4.4其它配合雾化治疗方法注意休息，防寒保暖，避免烟酒，低盐饮食。进行康复治疗、呼吸肌锻炼和体力锻炼，脱离污染环境，进行长期家庭氧疗（LTOT），尽管肺结构的改变不可能恢复到原状，平时也应有意识地多做一些锻炼呼吸耐力的运动，比如呼吸操以改善肺功能，令患者闭嘴，鼻子吸气，然后把嘴缩小缩唇吐气，尽量将呼气时间延长，慢慢吸气、吐气，每天练10分钟。
1.5疗效评定使用便携式血氧饱和度监测仪在干预前后连续监测患者的血氧饱和度，同时监测心率、呼吸和血压的变化，并对评价指标包括呼吸功能进行检测2结果
2.1雾化吸入对慢阻肺伴呼吸衰竭患者血氧饱和度的影响见表1。
3讨论
慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）是一种慢性气道阻塞性疾病的统称，具有不可逆性气道阻塞特点。临床治疗时多辅的利用雾化吸入方式，不仅有助于药物吸收，还可通过雾化作用稀化痰液、消除炎症和水肿。但在实践过程中，我们发现对于伴呼吸衰竭患者，进行雾化治疗过程中会引起剧烈咳嗽、呃逆、支气管痉挛、发音障碍及情绪紧张及失眠等不良反应，尤其当血氧饱和度下降后会加重患者缺氧，引发呼吸困难。缺氧是机体氧供与氧耗之间出现的不平衡，缺氧对机体有着巨大的影响，在严重的低氧状况时会导致心动过缓，血压下降，加重疾病病情。
雾化吸入时血氧饱和度下降的原因是多方面的，首先雾化气雾可稀释吸入气中氧浓度，造成肺泡氧分压降低，加重缺氧，其次患者雾化吸入方法的掌握不够自觉用力深呼吸使氧耗量增加，再者当雾化气体吸入后，若患者不能有效地咳嗽排痰，将进一步加剧气道阻塞的程度，有研究也表明慢性阻塞性疾病（COPD）患者疾病本身的生理病理特点也更容易出现血氧饱和度的下降，如COPD时肺泡通气量和血流比例失调、膈肌疲劳、肺功能受损等等。此外，超声雾化器所产生的雾粒直径一般为3.7-10.5μm，肺部的沉积量很少，这也使得血氧饱和度下降。
由此可见，雾化吸入对慢阻肺伴呼吸衰竭患者血氧饱和度的影响是多方面综合因素形成，自然临床对策也应针对性的从多方面着手。雾化设备调整是硬件方面的对策，我们利用氧气驱动雾化吸入，以氧气作为驱动力，利用高速氧流造成的负压直接将液滴撞击成微小颗粒，使药液雾化并推动雾化颗粒进入气道深部，有效的阻止了SaO2下降，研究表明，氧气驱动雾化吸入时雾化颗粒小减少了湿化气对呼吸道的阻力，避免了呼吸肌疲劳，面罩吸氧也使吸入气中的氧浓度明显提高[1]。雾化治疗时相关护理的积极施行是软件方面的对策，实践中我们对患者进行吸痰处理，最大可能通畅呼吸道，并在整个治疗过程对患者进行疾病宣教，指导患者呼吸，对不适应难以坚持者采用间歇吸入法。实践中我们还会到，雾化药物的使用也对患者血氧饱和度有一定影响，因此我们在常规沐舒坦注射液基础上加入硫酸沙丁胺醇雾化溶液，缓解呼吸痉挛，加大血氧的吸入[2]。此外平时的呼吸康复必不可少，康复干预有利肺功能恢复。在此应该注意的是，雾化吸入时不可放弃氧疗，因为长期氧疗能稳定或抑制肺动脉高压的发展，纠正低氧血症，还能使红细胞压积降低，血液黏稠度降低。
综上，雾化吸入对慢阻肺伴呼吸衰竭患者血氧饱和度虽然有一定程度的影响，但是进行针对性的干预及护理措施，有利于阻止血氧饱和度的下降，使雾化吸入完整持续进行，改善患者呼吸功能及预后，具有积极临床价值。参考文献
“动手实践，自主探索与合作交流是学习的重要方式”。由于每个学生的个体差异不同，他们对学习的需求也不同，因此，开展小组合作学习，能够实现优势互补，促进知识构建，培养学生的合作意识，给每个学生创造一个主动参与学习全过程的机会，促进学生的个性发展。同时，开展小组合作学习活动，是小班化实验的重要内容，是全面提高教学质量，培养学生主动探究、团结合作、勇于创新精神的重要途径。
2011年3月份，我市在六所小学开展了小班化教育实验研究，我校是小班化实验共同体学校之一。我校申报的实验课题是“农村小班化课堂中小组合作学习的研究”。本文主要从数学课堂的角度阐述研究的过程及结果。
二、主要调研方法
本调研主要采用观察法。我们按照教育科研观察法的操作要求，通过对调研对象进行课堂观察获得基础资料，再进行定量分析。
1.编制调查分析表
2.确定观察对象
调研期间，我们在学校开展的小班化实验研讨课中选择了三节课作为观察对象，由专人进行课堂实录整理。具体为：周老师的《圆的周长》，夏老师的《长方体和正方体的表面积》，马老师的《100以内数的认识》，这样基本反映了常态背景下的小班化数学课堂教学小组合作学习的现状。通过对这三节课的观察研究，以便发现问题，提出改进策略。
3.观察并整理数据
利用上表，进行课堂调查，计算在开展小组合作学习中教师行为和学生行为的状况，以及各子项参与合作学习的人数及百分比，填写《农村小班化小组合作学习记录表》。
4.结果研究
三、调研中发现的问题及分析
1.小组活动缺乏实质的合作
合作学习不是简单地把学生分成几个小组，停留在表面形式上，在具体的教学过程中还要关注很多深层次的问题。如在周老师的《圆的周长》这节课中，在探讨“圆的周长与直径”的关系时，其学习结果不能完全代表本小组的水平。究其原因，学生合作学习的意识和能力还没有形成，合作学习的策略有待训练和培养，教师在学习过程中没有及时提醒和指导每个组的学生进行相互讨论和交流。
2.小组中困难学生的学习落不到实处
调查发现，小班化的小组合作学习确实增加了学生参与的机会，但是在合作过程中困难学生由于学习能力的限制，在学习上跟不上节奏，他们往往成了听众，很少有独立思考的机会，只是从好学生那里直接获得合作的成果。
3.小组成员缺少互动、互助
小组合作学习过程中，学生间没有形成良好的互助、互动的关系，这会影响合作学习的顺利开展。如夏老师的《长方体和正方体的表面积》这课，教师把若干个小长方体分给学生，让学生四人一组合作探究怎样摆表面积最少时，个别学生把学具全部拿去，不让其他同学摆，缺乏合作意识。
4.教师在小组合作前没有讲清合作要求及意图
教师对教材重点内容编排意图的理解和设计是影响合作学习非常重要的因素。如马老师的《100以内数的认识》这一课，按照教材的编排意图，数100根小棒，要一根一根地数，数出10根捆成一捆，数出10捆。但是，马教师在教学时，在学生四个人一组合作数出100根小棒后，让每个小组的代表汇报自己小组数了多少根小棒，都是怎么数的。学生花了很多时间汇报自己是1根1根、2根2根、5根5根……数的，然后教师发现时间不够了，就匆忙结束合作学习，进入下一个教学环节。实际上这是教师没有完全理解教材的编排意图和重点，没有很好地设计怎样通过合作学习让学生理解所学知识，没有向学生说清楚合作的要求和目的是什么，学生最终没有体会数数的根据是十进制计数法，10个一是十，10个十是一百。
5.评价重整体、轻个体
我们研究小组合作学习时，认为小组合作学习以小组团体的成绩作为评价标准，这无疑是正确的。但是这可能把实施小组合作学习的教师引向一个误区：教师在教学时往往把评价和奖赏过多放在小组整体上，从而忽略了个体的发展。当然，研究者知道小组合作学习只是一种形式，它是为学生个性的全面发展服务的。问题是：教师怎样才能处理好小组合作与个体发展之间的关系呢？
四、解决上述问题的策略
对于大部分小学数学教师来说，小组合作学习是一个新事物，小班化的实验在我校更是刚刚开始，在小组合作学习的教学实践中出现一些问题是正常的，关键是我们要研究怎样通过理论学习和教学研究去克服这些障碍，使小组合作学习发挥其应有的作用。
1.认真学习小组合作学习及小班化的理论，更新教育观念
小班化的核心理念是“面向每一个”。在新课程的背景下，学生学习数学的方式发生了变化，由过去以教师讲授为主向以学生自己学习为主，真正确立了学生在学习中的主体地位。笔者通过这三节课的观察发现，有些教师还没有转变观念，在小组合作学习中没有体现学生的主体性、探究学习和算法多样化等新理念，小组合作学习只是走过场。数学教育改革是一个整体，教学组织形式是其中的一个部分，广大教师只有认真学习课程标准以及小班化所提出的理念，转变自己的教育理念，才能搞好小组合作学习。
2.处理好个人与小组的关系
在探索小组合作学习的教学模式中，我们提出在合作学习之前一定要留足充分的时间给学生先独立思考问题，每个学生有了初步想法后再进行探究、交流，共同解决问题。这样做给不爱动脑思考或学习有一定困难的学生提供了进步的机会，对提高这部分学生的学习是有帮助的。不讲原则的过多的合作学习也可能限制学生独立思考的空间，对学生个人能力的发展也是不利的。
3.处理好形式和目标的关系
任何教学组织形式都是为教学目标服务的，学生的全面发展也要通过多种教学组织形式来实现。教师的一切教学行为的出发点和归宿都是为了学生个性的全面发展。小组合作学了让学生掌握知识技能、培养合作的意识和能力外，还要培养学生探究的能力、健康的心理、良好的情感态度和价值观。
一、合理分组。保障合作学习顺利开展
合理分组，是小组合作学习取得成功的保障，小组合作学习组织形式是多种多样的，结合初中学生的特点和英语学科特点，可以采用以下三种形式。
（1）按座位就近分组。按座位就近组合，就是按班级正常的座位，将座位邻近的学生组成学习小组，根据具体课堂教学内容的需要，可以与partner进行Painwork，或每组一般4人左右的Groupwork。这种合作小组的组合形式，无需将学生分出层次、重新调整座位，因此操作起来比较简便。
（2）依学生特质分组。学生特质大致上可分为英语学习成绩、能力倾向、性格、爱好、年龄、性别等。教师可采用“组内异质，组间同质”的原则，使组内成员之间存在一定的互补性，合理搭配优等生和学困生。不同小组的总体水平保证基本一致，利于全班各小组间开展公平的竞争和评价。
（3）以任务为中心临时拼组。以任务为中心的小组组合是围绕一项具体的学习任务，让学生按个人兴趣自由组合，一般以4至6人为宜。以这种方式组合而成的学习小组往往是同质组合，小组成员之间的个性差异较小，更有利于高效地完成共同的学习目标。
（4）适时变更小组成员。教师要注意观察，了解学生。有些学生可能不喜欢与被分的同一组的某个同学合作，这样的话，教师要及时调整，否则会影响到整个合作学习小组的良性发挥。一般以4-5周调换一次或每学期换2-3次为理想。
二、制定有效的合作学习量规。培养合作学习习惯
小组活动应该是各成员共同承担任务，共同完成任务和共同分享合作成果。但在实际情况中，语言表达能力强的学生参与的机会明显较多，而另一些学生则习惯于当听众，很少或从不发表个人意见。因此，建立有效的、科学的合作学习量规，培养良好的、积极的合作学习习惯在很大程度上决定着小组合作学习的成效。
首先教师要阐明小组的整体性，让学生明确自己在小组内的职责，为整个小组的成功贡献力量；让他们明晰如果小组内有一人掉队，将会影响整个小组的成绩。第二，教师要在小组内设小组长，主要职责是对本组成员进行分工，组织成员有序地开展讨论交流。小组长可以轮换制，使每位学生都得到全面发展。第三，要求使用英语沟通。教师可在教室里张贴常用语汇表和常用日常交际用语，帮助学生开口，从而防止用汉语交流的情况。第四，小组活动展示时要规范，如：声音响亮；语音语调准确；仪态自然大方等。
三、设计科学的学习任务。提高合作学习的实效。
教师对合作学习任务设计的科学性、合理性影响着合作学习的实效性。没有科学的合作学习任务，就会导致学生的交流缺乏真正的意义，甚至出现用汉语交流的现象。因此，在下达合作学习任务之前，教师应做好以下几点：（1）根据教学内容设计小组活动内容。（2）根据教学内容、学生实际和教学环境条件等，精心设计合作学习的内容、次数和时间。（3）教师设计合作学习任务的难度要适当。
四、教师要正确把握好自己的角色，提高合作学习的质量
一、化学文摘号（CAS号）
（一）具有CAS号的物质
CAS号对应的有关标识信息以权威数据库为准（如SciFinder数据库、CA光盘版数据库、纸质版CA等CAS所属的产品或权威的相关数据库）。当已知申报物质CAS号存在被代替、删除等情况时，应予以提供。
（二）无CAS号的物质
经查证确认不具有CAS号的物质，不需要提供CAS号。对于正在申请CAS号的物质，申报单位应在CAS号申请完成后及时提交登记中心该物质的CAS号信息，包括CAS号、CA索引名称（CA Index Name）、全部其他名称（Other Name）、分子式和结构式。
二、名称
申报物质的名称包括中/英文化学名称、中/英文类名和其他名称。化学名称和类名的中英文应相互对应。
（一）中文名称
1.具有唯一、确定分子结构的物质
具有唯一、确定分子结构的物质应按照中国化学会《无机化学命名原则》（1980版）、《有机化学命名原则》（1980版）、全国科学技术名词审定委员会《高分子化学命名原则》（2005版）、国家标准《化学品命名通则》（GBT 23955），或参照现行的IUPAC命名规范文件，对各类化学物质进行命名。
2.无唯一、确定分子结构的物质
无唯一、确定分子结构的物质分为以下两种情况：
（1）有CAS号的物质：可参考CA索引名称命名中文名称，但必须符合中文命名规范基本要求。
（2）无CAS号的物质
聚合物：参照《高分子化学命名原则》。已知重复结构单元的，采用结构基础命名法命名；未知重复结构单元的，采用来源基础命名法命名。来源基础命名的表述形式一般为：单体1与单体2（单体3……和最后一个单体）的聚合物。
多步聚合的聚合物应分层次描述名称，不同层次应使用括号分开。
混合物：按照《中华人民共和国国家标准化学品命名通则》（GB/T 23955）命名。
反应产物：按照来源基础命名，表述形式为：反应物1与反应物2（反应物3……和最后一个反应物）的反应产物。
多步反应的反应产物应分层次描述名称，不同层次应使用括号分开。
来源于生物的化学物质或材料：按照《中华人民共和国国家标准化学品命名通则》（GB/T 23955）命名。
染料和颜料：采用C.I.（颜料索引）名称（有明确结构的染料和颜料除外）。
3.中文命名的一些注意事项
（1）学科中约定的名称可作为物质名称；
（2）中文名称中不允许出现空格；连字符“-”使用要符合化学物质命名的基本原则，不能随意增减；
（3）名称中所有的数字、英文字母、括号、连字符、撇等符号均应采取半角格式；
（4）有些特殊字符应使用斜体，如前述聚合物中的“α”、“ω”等；
（5）对于复杂的描述性名称，应采用括号表示不同层次，以便于识别与阅读。
（二）英文名称
应按照现行的IUPAC命名规范命名，或者使用CA 索引名称。其他英文名称、俗称、惯用名和行业内名称等，可以保留作为“其他名称”。
（三）类名
新化学物质常规申报登记时要求标识信息保密的，应给出中文类名和英文类名，此类名可用于新化学物质审批公示、公告、登记证，以及被公布列入《中国现有化学物质名录》时使用。中文类名应参照《新化学物质申报类名编制导则》（HJ/T 420―2008）编制，英文类名根据中文类名翻译编制。
三、分子式
应正确表述分子中各元素及其排列顺序和下标。
（一）无机物
按照单质、化合物（酸、碱、盐等）、配合物等结构组成的基本规范来表述。
（二）有机物
按照合并分子中同类元素的方式表述，不按照官能团方式表述。表述元素顺序按照C、H以及其他元素（按字母顺序）。
（三）有机金属化合物、有机盐
参照无机物分子式表述。对于结构或局部结构不确定的，采用“有机物分子式•x金属元素符号”方式表述，其中“有机物分子式”为完整的分子式；“•”为中圆点（不能是小数点）；“x”为构成系数，可以是整数或分数。
（四）聚合物
按照重复单元、结构单元或单体方式表述，形式如下：
1.重复单元方式：(重复单元分子式)x，其中“x”为下标，括号需使用半角括号；
2.结构单元方式：(结构单元分子式) x，其中结构单元内各组分单元间用中圆点“•”连接；
3.单体方式：(各单体完整分子式)x，其中各单体分子式间用中圆点“•”连接。
若聚合物具有非来自于聚合物单体的封端基团，应在聚合物分子式前后加上封端基团的分子式。
（五）混合物
按照组成成分方式表述，各组成成分的完整分子式间用“+”连接。
（六）反应产物
按照反应物方式表述，各反应物的完整分子式间用“•”连接。
（七）来源于生物的化学物质或材料
一般属于没有唯一确定分子结构的物质，组成繁杂、结构复杂，可不提供分子式。若有已知的确定成分，应给出已知成分的分子式，各已知成分分子式间用“+”连接，后接“+W99”表述其余未知成分。
（八）染料和颜料
一般属于没有唯一确定分子结构的物质，结构较为复杂，可不提供分子式。但对于已知分子结构的物质，应按上述规定给出分子式。
四、结构式
（一）有唯一、确定分子结构的物质
有唯一、确定分子结构的物质应使用ChemDraw软件绘制（下同）准确、完整的结构式。然后在ChemDraw界面复制结构式并直接粘贴到申请表Word文件的相应栏目中，不要另存为图片文件后再插入Word文件。
（二）主体结构唯一确定但局部结构不确定的物质
已经明确的主体结构应绘制其结构式，不确定键接位置的局部结构或局部结构可变的部分，应采取不定位置结构的表示方式或注释、文字说明的方式表述。例如，苯环上取代基位置不确定时，可以从苯环中心引出垂直于苯环某一边的键的方式来表示；局部结构没有确定的分子结构时，可以用中文或名称代替。存在多种不同结构形式时，应给出主要成分的物质结构式，并注明其为典型的结构形式，作为参考结构式。
具有明确重复单元或结构单元的聚合物，应绘制出其结构式，并在结构式左右两边加上括号，在右括号外加注“x”。若有非来自于聚合物单体的封端基团，应将封端基团的结构式绘制在括号两侧，并用键接线通过括号连接。
（三）结构不确定的物质
聚合物（具有明确的重复单元或结构单元的除外）、反应产物、混合物等无唯一、确定结构的物质体系，应按照各单体、反应体、组分在物质名称中出现的次序，依次绘制各单体、反应体、组分的结构式。当其中某单体、反应体、组分没有确定结构式时，可以用中文或英文名称代替。对于聚合物，各单体间用“•”连接，并在结构式左右两边加上括号，在右括号外加注“x”；对于反应产物，各反应体间用“•”连接；对于混合物，各组分间用“+”连接。多步反应的物质体系，应分层次用括号括起来。
（四）对结构式的其他要求
1.不接受Newman投影式作为结构式。
2.含有双键顺反异构、手性分子中心等的物质，其结构式中应包含相应的立体结构信息，标识字母用斜体。表示立体结构时应正确使用楔形线、虚线、实线等。
【关键词】 补阳还五汤; 生物碱; 苷; 三七总皂苷; 血浆药理学; 血管平滑肌细胞; 细胞增殖
Objective: To explore the effects of plasma containing Buyang Huanwu Decoction (BYHWD)， a compound of traditional Chinese medicine， and its effective components (alkaloids and glycosides) and total Panax notoginseng saponins (TSPN) on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation induced by plateletderived growth factor (PDGF) in vitro.
Methods: VSMC proliferation was induced by incubating VSMCs with PDGFBB. Effects of different concentrations of blank plasma on the VSMC proliferation and 50% inhibitory concentrations of plasma containing BYHWD， its alkaloids and glycosides， TSPN and atorvastatin were detected by using methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method to determine the concentrations of plasma containing drugs for the following experiments. Then， MTT and flow cytometry methods were used to detect the effects of plasma containing BYHWD， its alkaloids and glycosides， TSPN and atorvastatin on VSMC proliferative activity and cell cycles.
Results: VSMC proliferative activity was enhanced obviously after PDGFBB stimulation. The cell number in G0/G1 phase was decreased and the cell quantity in G2/M and S phases was increased following PDGFBB stimulation. Compared with PDGFBB stimulation group， VSMC proliferation induced by PDGFBB in plasma containing BYHWD， its alkaloids and glycosides， TSPN and atorvastatin groups was inhibited. In all plasma containing drug components groups， the cell number of G0/G1 phase was higher and the cell quantity of G2/M and S phases was lower than those in the PDGFBB stimulation group.
Conclusion: BYHWD and its alkaloids and glycosides have similar roles of resisting VSMC proliferation to TSPN and atorvastatin. Alkaloids and glycosides may be the major effective substances of antiVSMC proliferation in BYHWD.
Keywords: Buyang Huanwu Decoction; alkaloids; glycoside; total Panax notoginseng saponins; plasma pharmacology; vascular smooth muscle cell; cell proliferation
血清药理学方法是给动物灌服中药或复方一定时间后，取其血清进行体外实验的一种方法［1］。尽管血清药理学方法在中药和复方药理研究中有重要的作用，但其局限性也日益受到关注。在制备血清时由于血液凝固等的影响，血清药理学方法并不符合中药在体内的真实过程，含药血清中的“药效物质”可能并不能正确反映中药的有效成分。因而有人提出了用含药血浆进行中药或复方体外实验的“血浆药理学（plasma pharmacology）”方法［2］，这种方法有可能成为中药药理研究的重要方法之一。
补阳还五汤（Buyang Huanwu Decoction，BYHWD）为中医药治疗脑缺血、缺血性心脏病的有效方剂。我们的研究表明，该方中的生物碱、苷类组分为其主要的有效组分。该方及其有效组分生物碱和苷可抑制大鼠主动脉球囊导管损伤后血管内膜的增生，降低增生内膜中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、cyclin D1、cyclin E和细胞外基质成分Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ，ColⅠ)、纤联蛋白（fibronectin， FN）的表达，能抑制血管内膜损伤后血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）细胞周期的激活，阻抑细胞增殖，抑制细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的合成和促进其降解［3，4］。三七总皂苷（total Panax notoginseng saponins，TSPN）是从中药五加科植物Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen干燥根中提取的皂苷类有效组分，是三七的主要药理活性成分，在三七中含量高达8%～12%，其主要有效成分是人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）、人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1）和三七皂苷R1（notoginsenoside R1）等。研究表明，TSPN可显著抑制高脂血清对VSMC的促增殖作用［5］，抑制主动脉球囊损伤血管内膜增生模型大鼠血管内膜增生，降低增生内膜中cyclin D1、cyclin E和FN的表达，增强基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9，MMP9)的表达，提示TSPN可抑制血管内膜损伤后VSMC的过度增殖，减少ECM的沉积［6］。由于VSMC在血管增殖性病变中具有重要的地位，为了进一步阐明补阳还五汤、补阳还五汤有效组分及TSPN的作用环节，本研究采用血浆药理学方法和血小板衍生生长因子(plateletderived growth factor，PDGF）诱导的VSMC增殖模型，研究补阳还五汤、 补阳还五汤有效组分和TSPN对VSMC增殖的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 SpragueDawley大鼠，由湖南省卫生防疫站实验动物中心提供，体质量120～150 g，雌雄各半，合格证号为医动字第20010号。饲养在室温18～20 ℃，湿度65%～70%的环境中，自由饮水进食。
1.1.2 实验试剂 达尔伯克改良伊格尔培养基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium， DMEM）和胰蛋白酶（1︰250）购自美国Gibico公司。DMEM培养基以超纯水配制，过滤除菌，－20 ℃保存。胰蛋白酶以超纯水配成0.25%溶液，过滤除菌后分装，－20 ℃保存。胎牛血清（fetal bovine serum，FBS），购自杭州四季青试剂公司，56 ℃灭活补体30 min，过滤除菌后分装，－20 ℃保存。甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、PDGFBB和二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），均购自Sigma公司。碘化丙啶（propidium iodide，PI）和RNA酶抑制剂（RNase inhibitor），均购自北京鼎国生物科技有限公司。其余试剂均为分析纯。
1.1.3 实验药物 补阳还五汤由黄芪60 g、赤芍9 g、川芎6 g、当归9 g、地龙9 g、红花9 g、桃仁9 g组成。按我们以往的方法［4］提取原方水提取物和其有效组分生物碱、苷。补阳还五汤生药浓度为1 g/mL。以高效液相色谱法测定各提取物中有效物质的含量。苷类组分中黄芪甲苷含量为1.40 mg/g，芍药苷为19.11 mg/g，苦杏仁苷为17.92 mg/g；补阳还五汤中含黄芪甲苷0.38 mg/g，芍药苷1.16 mg/g，苦杏仁苷0.90 mg/g；生物碱类组分中川芎嗪含量为6.00 mg/g；补阳还五汤中川芎嗪含量为0.01 mg/g。以去离子蒸馏水将苷类有效组分配成苷含量为0.71 g/mL的溶液，将生物碱类有效组分配成生物碱含量为0.08 g/mL的溶液待用。
TSPN，购自广西梧州制药（集团）股份有限公司，批号为071119。经检验，TSPN为淡黄色无定形粉末，味苦微甜，易溶于水。用薄层色谱鉴别，具有人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的特征性斑点，水溶液pH 6.1。以高效液相色谱法测定其主要有效成分［6］，可见到人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的特征性色谱峰，含人参皂苷Rg1 50.4%，人参皂苷Rb1 30.9%，三七皂苷R1 12.5%。
阿托伐他汀（atorvastatin)，10 mg/片，Godecke GmbH生产，辉瑞制药有限公司分装，批号为080117。临用时以去离子蒸馏水配成2 mg/mL混悬液。
1.2 实验方法
1.2.1 大鼠主动脉VSMC的培养和鉴定
1.2.1.1 原代细胞培养 采用组织贴块法培养原代细胞。每次取大鼠2～3只，处死，75%酒精消毒，切开胸腹部，无菌条件下分离胸腹主动脉，以Hank’s液洗净，剪去血管外小分支。移入含20% FBS的DMEM中，剪开血管腔，以镊子轻轻擦拭内膜层3～5次去除内皮细胞。然后将血管放入DMEM中（含20% FBS），剪碎血管至1 mm2左右大小。将组织块转入培养瓶中，均匀贴壁，组织块间距为0.5 cm。盖好瓶盖，轻轻翻转培养瓶使瓶底朝上，并向瓶内注入适量含20% FBS的DMEM液，于37 ℃、5% CO2培养箱内放置4～5 h，使组织块干涸，并与瓶底贴附。然后将培养瓶慢慢翻转平放，使组织块完全浸入培养液中，继续静置3～5 d。待有细胞从组织块周围游离出后，采用半量换液方式换液，2～3 d换液1次，待原代培养2～3周至细胞长成致密单层即可传代。
1.2.1.2 细胞传代及培养 取原代生长的VSMC，以Hank’s液洗涤后，加入0.25%胰蛋白酶消化，以FBS终止反应，DMEM洗涤后，以含20% FBS的DMEM制成106/mL细胞悬液进行传代培养，以1︰2的比例传代。
1.2.1.3 细胞鉴定 实验用4～6代VSMC。用免疫细胞化学法测定VSMC α平滑肌肌动蛋白的表达，进行细胞鉴定。
1.2.2 含药血浆的制备 按文献方法［7］将大鼠随机分为空白组、阿托伐他汀组、补阳还五汤组、生物碱组、苷组和TSPN组，每组10～12只。空白组灌胃等量蒸馏水（给药体积为10 mL/kg），补阳还五汤组灌胃补阳还五汤（生药量22.2 g/kg），生物碱组灌胃生物碱类有效组分（1.66 g/kg），苷组灌胃苷类有效组分（14.2 g/kg），TSPN组灌胃TSPN（200 mg/kg），阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀（20 mg/kg）。每天给药两次，分别在上午9时和下午4时。连续灌胃7次后，于末次给药后2 h，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，颈总动脉取血，以1.5% EDTANa2抗凝（血液︰抗凝剂=9︰1），4 ℃、3 000 r/min离心15 min取血浆。将各给药组各鼠血浆等量混合即为含药血浆，空白组各鼠血浆等量混合即为空白血浆。过滤除菌后分装，－70 ℃保存。
1.2.3 空白血浆对VSMC生长的影响 采用MTT法测定。VSMC培养于96孔培养板，然后以无血清DMEM培养24 h使细胞生长同步化于G0期，分别加入不同浓度空白血浆（终浓度为0%、1%、5%、10%、15%、20%、25%），每孔总体积200 μL。培养24 h后，加入MTT（5 mg/mL）20 μL，4 h后倾去培养液加入DMSO 200 μL，振荡10 min后酶标仪上检测490 nm处光密度值（optical density，OD），计算空白血浆对VSMC生长的抑制率（inhibitory rate，IR）：IR=［1－(实验组OD值/空白组OD值)］×100%。空白血浆的每个浓度在同一培养板上重复5次。取IR＜20%的血浆浓度作为对细胞正常生长无影响的浓度。
1.2.4 含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的半数抑制浓度测定 采用MTT法测定各含药血浆对VSMC增殖抑制的半数抑制浓度（50% inhibitory concentration，IC50）。各含药血浆分为无血浆空白对照组，PDGFBB刺激组，终浓度分别为1%、5%、10%和15%的血浆组。VSMC培养于96孔培养板，然后用无血清培养基培养24 h使细胞生长同步化于G0期，再分别加入不同终浓度的各含药血浆。3 h后加入PDGFBB（终浓度10 ng/mL），总体积为200 μL。培养24 h后，加入MTT（5 mg/mL）20 μL，4 h后倾去培养液加入DMSO 200 μL，振荡10 min后检测490 nm处OD值。各含药血浆的每个浓度重复5次，IR＝［（PDGFBB刺激组OD值－含药血浆组OD值）/（PDGFBB刺激组OD值－无血浆空白对照组OD值）］×100%。以含药血浆浓度为自变量，IR为因变量进行logistic回归分析，求出各含药血浆抑制50% VSMC增殖的浓度（IC50）。
1.2.5 PDGFBB诱导的VSMC生长曲线的测定 采用MTT法。VSMC培养于96孔培养板，然后用无血清培养基培养24 h使细胞生长同步化于G0期。实验设为无血浆空白对照组、PDGFBB刺激组、空白血浆组、阿托伐他汀含药血浆组、补阳还五汤含药血浆组、生物碱含药血浆组、苷含药血浆组和TSPN含药血浆组。无血浆空白对照组每孔加入200 μL培养液。PDGFBB剌激组加入180 μL培养液，3 h后加入PDGFBB（终浓度10 ng/mL）20 μL。空白血浆组和各含药血浆组分别加入160 μL培养液、20 μL空白血浆或含药血浆（终浓度为10%，各含药血浆终浓度约为各含药血浆的IC50），3 h后加入PDGFBB 20 μL。37 ℃、5% CO2继续培养。分别于0、12、24、48 h后取出培养板，每孔加入20 μL MTT（5 mg/mL），继续37 ℃、5% CO2孵育4 h。吸除培养板各孔液体，每孔加入200 μL DMSO并震荡10 min，测定各孔490 nm OD值，以OD值反映VSMC的增殖活性。
1.2.6 VSMC细胞周期的测定 将培养细胞分为无血浆空白对照组、PDGFBB刺激组、10%空白血浆组、10%阿托伐他汀含药血浆组、10%补阳还五汤含药血浆组、10%生物碱含药血浆组、10%苷含药血浆组和10% TSPN含药血浆组。用无血清培养基培养24 h使细胞同步化于G0期，然后分别加入各含药血浆，3 h后除无血浆空白对照组外各组均加入PDGFBB（终浓度10 ng/mL），培养24 h后用流式细胞分选术测定VSMC细胞周期。取约1×106个细胞/mL，用75%酒精固定后用PBS洗一遍，室温、避光下PI染色(含PI 50 μg/mL，RNase inhibitor 100 μg/mL，0.1% Triton X100)，至少30 min后上机测定，流式细胞仪（型号FACSCalibur，美国BD公司生产）上检测各细胞周期的百分率，CellQuest软件分析结果。
1.3 统计学方法 应用SPSS 16.0统计学软件进行分析。实验结果数据采用x±s表示。多组间均数比较用单因素方差分析，组间两两比较方差齐者用LSD法检验，方差不齐者用Dunnet’s T3法检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 VSMC鉴定 倒置显微镜下，培养的VSMC贴壁生长，细胞呈长梭形，放射性生长，细胞胞质透明，相互融合在一起。成束的细胞平行排列，呈铺路石样“峰谷”状生长。可见到VSMC胞浆中α平滑肌肌动蛋白呈阳性表达，纯度达90%以上。表明培养的细胞为VSMC。
2.2 空白血浆对VSMC生长的影响 随着浓度的增加，空白血浆对VSMC增殖的抑制作用逐渐增强，当空白血浆浓度达20%时，其对VSMC增殖的抑制率为39.41%，表明空白血浆对VSMC生长具有一定的抑制作用。而空白血浆浓度为15%时，对VSMC增殖的抑制率为16.99%。故在实验中所用血浆的浓度不超过15%。见图1。
图1 空白血浆抑制VSMC生长的抑制曲线（略）
Figure 1 VSMC growthinhibitory curve of blank plasma
2.3 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的IC50 各含药血浆可以显著抑制由PDGFBB诱导的VSMC增殖，随着浓度的增高，抑制作用增强，各含药血浆的IC50均为10%～15%，各含药血浆IC50比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。由此确定各含药血浆的加入浓度均取10%。见表1和图2。
2.4 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的影响 随着培养时间的延长，各组VSMC增殖活性逐渐增强，其中以PDGFBB刺激组VSMC增殖活性最强，PDGFBB刺激组12～48 h时的增殖活性显著高于无血浆空白对照组（P＜0.05）。空白血浆组的细胞增殖活性也较强，在12～48 h时也显著高于无血浆空白对照组（P＜0.05），但其增殖活性略低于相应时间点的PDGFBB刺激组（P＜0.05），表明空白血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖有轻微的抑制作用。各含药血浆组VSMC增殖活性降低，在12～48 h时均显著低于空白血浆组（P＜0.05），表明各含药血浆能抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖。各含药血浆组VSMC增殖活性在12～48 h时均高于无血浆空白对照组（P＜0.05），表明各含药血浆并不能完全抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖。各含药血浆组VSMC增殖活性比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。表明终浓度为10%的含药血浆在24～48 h时均可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖。因此，确定在以下的实验中含药血浆的作用时间为24 h。见表2。
2.5 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖细胞周期的影响 PDGFBB刺激组与无血浆空白对照组比较，G0/G1期细胞数显著减少（P
表1 各含药血浆抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖的IC50（略）
Table 1 IC50 of plasma containing various components on VSMC proliferation induced by PDGFBB
图2 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的抑制曲线（略）
Figure 2 VSMC growthinhibitory curves of plasma containing various components induced by PDGFBB
A: Plasma containing alkaloids; B: Plasma containing glycosides; C: Plasma containing BYHWD; D: Plasma containing TSPN; E: Plasma containing atorvastatin.
表2 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的影响（略）
Table 2 Effects of plasma containing various components on VSMC proliferation induced by PDGFBB
*P
表3 各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖细胞周期的影响（略）
Table 3 Effects of plasma containing various components on VSMC proliferative cycle
*P
3 讨论
3.1 用含药血浆进行中药及复方体外实验的可行性 在研究药物的作用时，常采用体外实验。由于中药和复方复杂的化学成分及其代谢过程，利用中药粗提物直接加入体外实验体系进行实验，常影响实验结果的真实性和可靠性。1987年，日本学者Iwama等［8］首先报道了用动物含药血清进行体外实验的药理学方法，是一种给动物灌服中药或复方一定时间后，取其血清进行体外实验的方法。认为进入动物血液的是含有真正有效成分的“中药提取物”（包括中药的固有成分及其代谢产物，以及它们在吸收后作用于机体产生的生理活性物质）。这种方法被命名为“血清药理学（serum pharmacology）”方法，是研究中药或复方药理作用的一个实用的体外实验系统，不仅能反映中药中可吸收部分的直接作用，还能反映药物成分在体内形成的代谢产物和药物诱生的机体内源性活性物质的作用，更接近药物在体内环境下产生的真实过程，为从细胞和分子水平研究中药药理作用提供了新的手段。其后，对这种实验方法的条件进行了大量的研究，在实验对象的选择、给药剂量的确定、给药方案、采血时间、血清的处理等方面日趋规范。
尽管血清药理学方法在中药和复方药理研究中有重要的作用，但其局限性也日益受到关注［2］。其局限性主要表现在以下几个方面。
（1）给动物灌服中药后，被胃肠道吸收的中药成分首先进入血液，更确切地说，是进入血浆。但血浆并不等同于血清，血清是血液凝固后去除纤维蛋白与血细胞后留下的液体。在血液凝固过程中，除凝血系统激活外，同时还伴有抗凝系统、纤溶系统、抗纤溶系统、补体系统以及激肽系统发生不同程度活化，故血清不能简单地理解为去纤维蛋白的血浆。由于血液凝固的影响，可能会导致吸收入血的某些中药成分降解，或使某些本无活性的中药成分水解成有活性或毒性的成分，故含药血清中的药物成分并不一定反映的是中药进入血液中的成分。因此血清药理学方法不能视为符合中药在体内的真实过程。
（2）凝血过程有一系列酶生成，这些酶可能降解某些中药成分，也可能使某些本无作用的原形成分经过降解而产生一定的活性。同时，在制备血清的过程中，有些成分可能与血细胞和血浆蛋白结合或吸附，在去除纤维蛋白和血细胞以及灭活血清时，必然导致部分中药成分和中药引起体内释放的某些生物活性物质损失。因此，血清药理学方法可能并不能正确反映中药的有效成分。
（3）凝血过程中产生的凝血酶可刺激血小板与白细胞释放大量生物活性物质，所以正常血清具有明显生物活性。因此，血清药理学方法可能并不能正确排除正常血清对实验结果的影响。
药理研究的理想方法是使用单体化合物进行实验。但在当前条件下，大多数中药及复方难以做到这一点。因此半体内实验在中药药理研究中占有重要地位。由于血清药理学方法存在一些弊病，而血浆是血液在抗凝条件下去除血细胞的液体，吸收入血的中药成分就在其中。采用HPLCMS指纹图谱分析方法，观察到含药血清丧失了大部分中药极性成分，但含药血浆却保留了大部分中药成分［2］。由于它未发生凝血反应，可以避免由此带来的对中药作用的干扰效应。因此，血浆药理学方法有可能成为中药药理研究的重要方法之一。
本研究采用血浆药理学方法研究了补阳还五汤和其有效组分及TSPN对体外培养的VSMC增殖的影响。结果表明，空白血浆对VSMC生长和细胞周期具有轻微抑制作用。其原因可能是在制备血浆时，由于使用EDTANa2作为抗凝剂，而EDTANa2具有较强的络合Ca2+的作用，从而影响VSMC生长。这提示在制备含药血浆时，应进行抗凝剂选择的研究，以尽可能排除血浆制备过程中的各种影响。各含药血浆与空白血浆比较，均可显著抑制VSMC生长，表明采用含药血浆进行体外实验对于评价中药或复方的作用是可行的。
3.2 补阳还五汤和其有效组分及TSPN对VSMC增殖的影响 中膜VSMC迁移到内膜下层并异常增殖是动脉粥样硬化、冠状动脉球囊扩张术（percutaneous coronary intervention，PCI)后血管再狭窄等血管增殖性病变的共同细胞病理基础，抑制VSMC的异常迁移、增殖，阻抑血管损伤后内膜增生是治疗血管增生性疾病的关键［9］。已有的研究表明，血管紧张素受体拮抗剂、降血脂药羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂等可对抗VSMC增殖，从而延缓血管增生性病变的发生［10，11］。因而，进一步寻找可以从多环节、多靶点影响VSMC增殖的药物，具有重要的意义。中药及复方具有多成分、多效应的特点，对于复杂疾病的成因和发展可以进行多环节、多靶点的调节，这种作用特点符合VSMC异常增殖的原因和病理生理机制。研究显示［12，13］，多种植物药及有效成分具有抑制VSMC增殖的作用，对PCI后血管再狭窄可进行有效的防治。但目前中药的研究还存在制剂较粗糙、质量不稳定、作用机制不明确等缺点。因此，进一步开展中药及其有效成分抗血管再狭窄的研究，对寻找作用明确、成分相对清楚、质量可控的中药及其复方制剂，提高中医药疗效具有重要的意义。
本研究表明，PDGFBB剌激后，VSMC增殖活性显著增强，G0/G1期细胞数减少，G2/M期和S期细胞数增多。表明在PDGFBB剌激后，VSMC细胞周期启动，细胞增殖增快。与PDGFBB剌激组比较，空白血浆可使G0/G1期细胞数增多，G2/M期和S期细胞数减少。这可能是血浆中含有的抗凝剂EDTANa2对细胞生长的影响所致。阳性对照药阿托伐他汀含药血浆可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖，增加G0/G1期细胞数，减少G2/M期和S期细胞数。表明阿托伐他汀对PDGFBB诱导的VSMC增殖具有抑制作用。补阳还五汤含药血浆、有效组分生物碱含药血浆、苷含药血浆和TSPN含药血浆均可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖，增加G0/G1期细胞数，减少G2/M期和S期细胞数。表明补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷均可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖。前期研究表明，补阳还五汤及其有效组分和TSPN可抑制大鼠主动脉球囊损伤后血管内膜增生，延缓血管再狭窄的发生［4，6］，因而，抗VSMC增殖作用是补阳还五汤和TSPN延缓血管再狭窄病变的主要作用机制，生物碱和苷可能为补阳还五汤中抗VSMC增殖的主要药效物质，补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷具有与阿托伐他汀、TSPN相似的抗VSMC增殖的作用。
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