【关键词】前列宁颗粒剂；大黄酸；黄芪甲苷；提取工艺；正交设计
Abstract:［Objective］TofilterandoptimizeextractivetechnologyofQianlieninggranules.［Methods］TheoptimizationextractivetechnologyofQianlieninggranuleswasinvestigatedusingorthogonaldesignwiththeavailabilitycomponentextractingfromthedrugastheindex.［Results］TheoptimalconditionfortheextractionofRadixAstragaligroupwas10foldsamountofwater，3times,1.5hourseachtime.TheoptimalconditionfortheextractionofRheumofficinalBaill.groupwas6foldsamountof60%alcohol,2times,twohoursand1.5hourseachtime.［Conclusion］Theoptimizedextractivetechnologyisscientificandefficient.
Keywords：QianlieningGranules；Rhein；AstragalosideIV；extractivetechnology；orthogonaldesign
前列宁颗粒由酒大黄、黄芪、牛膝、菟丝子等多味中药组成，为我院中西医结合系洪振丰教授的经验方，具有清热解毒、活血化瘀、益气补肾之功效，用于治疗慢性前列腺增生及前列腺炎等症，疗效显著［1］。为方便临床用药和患者携带，实验对组方成分进行分析，根据各味药材所含成分的理化性质，拟分水溶和醇溶两组提取。其中黄芪、菟丝子等药采用水煎煮提取，酒大黄、牛膝等药采用醇提，对其提取工艺采用正交实验法进行研究，以确定最佳提取工艺，使制剂工艺更加合理。
1仪器与试药
美国Waters600E高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，四元泵，在线真空脱气机，Millennium32色谱工作站；SartoiousBT25S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；恒温干燥箱(北京市朝阳区来广营医疗器械厂)；DKS24型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)。
酒大黄、黄芪等实验药材均购自福建同业有限公司，经我院药学系鉴定符合2005版中国药典（一部）有关规定；大黄酸对照品（批号0757-200206，购自中国药品生物制品检定所）；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110781-200512)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1水煎煮组正交试验设计
采用正交试验法对黄芪、菟丝子等药组水煎液提取工艺进行优选。根据文献报道［2］，以提取次数(A)、提取时间(B)、加水量(C)为试验因素，每个因素3个水平进行优选，以浸膏得率和黄芪甲苷含量作为考察指标进行试验。因素水平见表1。表1水煎煮组的因素水平表（略）
浸膏得率测定：精密吸取母液20ml，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃下干燥3h，迅速取出，放入干燥器中，冷却30min，迅速精密称定，计算出膏率。
2.2水煎液中黄芪甲苷的测定［3］
2.2.1色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(38:62)为流动相；流速为1.0ml/min。蒸发光散射检测器检测。此色谱条件下，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算，应不得低于4000。
2.2.2对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品4.0mg，置于10ml容量瓶中，加入甲醇定容，制成0.4mg/ml的溶液，即得。
2.2.3供试品溶液的制备
按正交表条件提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩至1:1（g/ml），加乙醇使醇浓度达75％，低温静置24h，取上清液减压回收乙醇，浓缩定容于100ml量瓶，摇匀。分别精密量取20.0ml，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶液并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。
2.2.4标准曲线绘制
精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10μL，分别注人高效液相色谱仪，依法测定。回归方程为Y=7985.56X+1457.24，r=0.9998。结果表明，黄芪甲苷进样量线性范围为2.014～10.070μg。
2.2.5精密度试验
取同一份供试品溶液，按上述色谱条件重复测定5次，计算精密度，结果黄芪甲苷峰面积的RSD为0.23％(n=5)。
2.2.6重复性试验
取同一批号样品，配制3种浓度，照含量测定项下方法每个浓度测定3次，结果RSD为1.07％、1.58％、1.91％，表明重现性较好。
2.2.7稳定性试验
取同一份供试品溶液，在0，4，16，24，48h分别进样5次，依法分别测定黄芪甲苷蜂面积值。结果RSD<2.0％，表明本品在48h内测定结果稳定。
2.2.8加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品，各精密加入黄芪甲苷对照品适量，按2.2.3项下方法制备供试液，依法测定并计算加样回收率，得平均回收率为98.21％，RSD＝1.41％。
2.3水煎煮组最佳工艺确定
正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。按下列公式计算综合评分值:出膏率加权评分(y1)＝(出膏率-12)/（25-12）×100；黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-0.2)/（0.4-0.2）×100。综合评分=（yl+y2）/2。表2水煎煮组正交试验结果（略）表3水提工艺方差分析表（略）中国
由表2可见，3个因素的级差大小顺序为A>C>B，提取次数对提取工艺的影响最大，加水量影响较大，提取时间影响最小。由表4可见，因素A(提取次数)、因素C(加水量)有显著性，因素B(提取时间)无显著性。故最佳工艺为A3B1C3，即用10倍量水，提取3次，每次1.5h。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验，可知，三批样品出膏率分别为24.14％、24.09％、23.97％；黄芪甲苷含量分别为0.397、0.384、0.391mg/g。验证结果表明工艺基本稳定可行。
2.4醇提组正交试验设计
根据文献和预实验结果［4］，采用正交试验法。以浸膏得率和大黄酸的含量为考察指标，对乙醇浓度(A)、醇用量(B)、提取时间(C)3个试验因素，每个因素3个水平进行优选，并以浸膏得率和大黄酸含量作为考察指标进行试验。因素水平见表4。表4醇提组的因素水平表（略）
2.5大黄酸含量测定
2.5.1色谱条件
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱为SHIMADZUC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85∶15)，检测波长为254nm，流速为1.0ml/min。理论塔板数按大黄酸峰计算应不低于3000。
2.5.2对照品溶液的制备
精密称取干燥2h后的大黄酸对照品0.038g，置于25ml量瓶中，加甲醇至刻度，得含大黄酸0.152mg/ml的对照品溶液，备用。
2.5.3线性关系考察
分别精密量取大黄酸对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，分别进样5μl。以进样量(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=7867.756X+1.6727(r=0.9998)。结果表明，大黄酸进样量在0.076～0.380μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5.4供试品溶液的制备
用L9(34)正交表安排试验，称取处方量的药材，按设定方案进行回流，收集回流提取液，定容至200ml，精密量取50ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称量。精密量取已定容样品液50ml，水浴蒸干，加5mol/L。硫酸溶液20mL，置水浴加热1h，立即冷却，加氯仿提取3次(30、30、20ml)，合并氯仿液，加水洗涤2次(20、20ml)，弃去水层，氯仿液水浴蒸干，残留物加甲醇定容至5ml，即得。
2.5.5含量测定
分别精密吸取对照品溶液5μl、供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按“2.5.1”项下色谱条件测定。高效液相色谱见图1。
2.5.6精密度试验
精密量取“2.5.2”项下大黄酸对照品溶液5μl，重复进样6次测定峰面积。结果，峰面积RSD=1.3％，表明仪器精密度良好。
2.5.7稳定性试验
取“2.5.4”项下的供试品溶液。分别于0，4，16，24，48h时按“2.5.1”项下色谱条件进样测定5次。结果：峰面积RSD=1.18％。表明供试品溶液在48h内稳定性较好。
2.6醇提组最佳工艺确定
正交试验结果见表5，方差分析结果见表6。按下列公式计算评分值：出膏率加权评分(y1)＝(出膏率-13)/（20.5-13）×100；黄芪甲苷含量加权评分(y2)=(测定量-5)/（9.4-5）×100。综合评分=（yl+y2）/2。表5醇提组的正交试验结果（略）表6方差分析结果（略）
由表5可见，3个因素的级差大小顺序为C>A>B，提取时间对提取工艺的影响最大，醇浓度影响较大，醇用量影响最小，实验结果最佳工艺为A2B2C3。由表6可见，提取时间有显著性，醇浓度、醇用量无显著性。考虑生产成本，确定A1B1C3为最佳工艺，即用6倍量60％醇溶液，提取2次，分别为2.0、1.5h。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验，可知，三批样品出膏率分别为20.24％、20.32％、19.97％；大黄酸含量分别为9.41、9.37、9.31mg/g。验证结果表明工艺基本稳定可行。
3讨论
验方中大黄取其解毒泄下之功，以清体内热毒，使湿热由下而去；取其活血祛瘀之功，使血行通畅，瘀血得解；一药两用，为君药。而其中大黄酸具有抗菌抗炎作用，故醇提组选择以大黄酸作为含量测定指标。黄芪取其补气之功而治前列腺增生日久气虚之候，而其利水之功又可助它药以泄湿，故水提组以黄芪甲苷作为指标成分。黄芪等药味中的活性成分在水中有较好的溶解度，故考虑用传统的水煎煮提取。大黄、牛膝等醇提组药物中有效成分在醇溶液中溶解度较大。
前列宁颗粒为复方制剂，成分复杂。试验选择以浸膏得率和相应的含量测定为指标，可综合评价工艺的合理性。采用正交设计的试验方法对提取工艺进行优化筛选，确定的提取工艺简便、科学，符合生产要求。
【参考文献】
［1］周建衡，洪振丰，林久茂，等.前列宁颗粒对前列腺增生的影响［J］.福建中医学院学报，2008，18（5）：4547.
［2］韩冬云，王文杰，李姝红.正交设计法优选降糖甲片提取工艺［J］.中国现代中药,2008,10(9):3032.
【关键词】舒督丸提取溶剂提取工艺柚皮苷
StudiesontheExtractionProcessofShuDuPill
Abstract：ObjectiveToselecttheextractionsolventandconditionsofShuDuPill.MethodsAceticacidwrithingmethodonmicewasusedtocomparetheanalgesiceffectsofthewaterextractandthealcoholextractorthogonaldesignwasusedtooptimizethereasonableextractionconditionswiththeevaluationmarkerssuchasnaringinextractionrateandwaterextract.ResultsTheanalgesiceffecttreatedwiththewaterextractismoresignificant.Theextractionconditionswereasfollows：themedicalmaterialwassoakedin6，4，4，2timeswaterandboiled4times,3，2，1，1hoursforeachtime.ConclusionTheextractionconditionsestablishedcanmaketheextractionrateofactivecomponentshighandmakethetherapyandqualityoptimal.
Keywords：ShuDuPill；Theextractionsolvent；Theextractionprocess；Naringin
舒督（浓缩）丸是治疗强直性脊柱炎的中成药，由骨碎补、桑寄生、狗脊、络石藤、牛膝等药味组成。根据强直性脊柱炎的病因与临床症状，方剂中药物的抗炎镇痛、活血祛瘀、调节免疫功能等是其主要药理作用。据文献报道［1～3］，骨碎补中的柚皮苷与络石藤中的木犀草素等有抗炎作用；桑寄生中的槲皮素等具有镇痛作用；牛膝中的多糖等成分有改善机体免疫功能等多种药理活性。这些成分的溶解性较复杂。根据强脊炎疼痛症状突出的临床表现，本研究以小鼠镇痛药效试验为指标，对该方剂的提取溶剂进行了筛选，并以柚皮苷提取率和水总浸出物提取率为评价指标，采用正交设计优选其提取工艺条件。
1器材
1.1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱。柚皮苷中国药品生物制品鉴定所（批号：110722200309，含量测定用）。所用试剂均为分析纯，含量测定试剂为色谱纯。药材购于河南省药材公司，骨碎补药材中柚皮苷含量为0.75%。
1.2实验动物
昆明种小鼠，河南省实验动物中心提供（许可证号：SYXK（豫）20050012），雌雄各半，体重18～22g。河南省食品药品检验所动物室许可证号：SYXK（豫）20050011。动物饲料为标准颗粒饲料，购自北京科奥协力饲料有限公司（许可证号：SCXK（京）20050007）。
2方法与结果
2.1提取溶剂的选择
2.1.1供试样品的制备
按处方比例称取药材两份，一份水煎煮两次（6倍量/2h，4倍量/1h），另一份75%乙醇回流2次（6倍量/2h，4倍量/1h）过滤，合并药液，减压浓缩，分别制成1.0g原生药/ml的流浸膏，密封，灭菌，备用。
2.1.2药效试验
取小鼠60只，雌雄各半，随机分组，灌胃给药，用醋酸扭体法比较不同溶剂提取物的镇痛效果［4］。结果见表1。表1舒督丸不同溶剂提取物对小鼠疼痛的抑制作用（略）
药效试验结果显示，舒督丸不同溶剂提取物均可抑制小鼠疼痛，其中以水提物镇痛效果最好。因此，确定以水为提取溶剂。
2.2提取工艺因素的优选
2.2.1柚皮苷的含量测定方法［5］
2.2.1.1色谱条件
ZOPBOXISBC18（4.6mm×200mm，5μm）色谱柱；流动相甲醇醋酸水（35∶4∶65）；检测波长283nm。
2.2.1.2对照品溶液的制备
精密称取柚皮苷对照品20mg，甲醇定溶于100ml量瓶中，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含柚皮苷60μg）。
2.2.1.3供试品溶液的制备与测定
取含相当于骨碎补0.3g的提取液，稀硫酸调pH值3～4,水浴蒸干，加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中至刻度，摇匀，即得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,于283nm处测定并计算柚皮苷含量，计算提取率。
2.2.2水总浸出物的测定方法
分别精密量取水提药液各25ml，按浸出物测定法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录XA）操作，以25ml提取液相当于原药材量作为分母，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的浸出率。
2.2.3提取工艺因素与水平的正交实验选择加水量、提取时间和提取次数3个因素，每个因素选择3个水平，见表2。用L9（34）正交表进行正交实验设计。表2实验因素水平表（略）
取复方饮片9份，每份354g，按表3正交表设计方案进行回流煎煮提取，合并提取液，滤过，吸取药液适量，测定柚皮苷含量和水总浸出物量，计算提取率，见表3。表3舒督丸提取工艺正交实验方案与结果（略）
2.2.4舒督丸提取工艺因素的正交试验结果与分析结果见表3～4。表4舒督丸提取工艺正交试验结果方差分析（略）
由综合评分直观分析可知，上述因素中，B因素影响最明显，应取3水平；C因素次之，应取3水平；A因素应取2水平。
由上表可看出，显著影响提取效率的工艺因素是B。取重要因素较高水平的组合，得到最佳工艺条件为：A2B3C3。即提取4次，每次分别为3，2，1，1h，每次加水量分别为6，4，4，2倍。
2.3验证实验
取复方饮片，按最佳工艺条件重复提取3次，测定柚皮苷和水总浸出物得率。结果见表5。表5验证实验结果（略）
从上述试验结果可以看出:所筛选出来的工艺合理可行,稳定可靠,具有可操作性和重现性。
3讨论
3.1舒督丸方剂中有效成分既有水溶性，也有脂溶性的，理论上既需要用亲脂性溶剂也需要用水提取，才能使有效成分充分溶出。但是复方中各药材成分间在提取时往往会发生复杂的相互作用，从而使有效成分溶解度及存在状态发生变化影响到药效。因此，采用药效学方法筛选提取溶剂,与常规的化学法相比,其筛选结果与临床用药效果更为接近。本实验以小鼠醋酸扭体法比较该方剂水和乙醇为溶剂的提取物的镇痛效果，结果表明以水为溶剂效果优于乙醇，与该药原配制用溶剂产生的疗效一致。
3.2由药材成分浸出原理可知，溶剂对药材的浸润与渗透、溶解与解吸和成分扩散置换过程，在第1次提取即已经完成，后续的多次提取，主要是更换溶剂，保持浓度差。所以，在本研究中，每个煎煮时间和加水量水平设计为依次递减。结果证明优化出的提取工艺参数可以使有效成分达到较高的提取率，节省了大量的工时，降低了水和能耗。
3.3在柚皮苷含量测定时发现复方提取物中柚皮苷提取率很低，与其溶解性能不符。通过对方中骨碎补与其他药材两两配伍提取实验发现，是由于其与桑寄生中某成分形成了水溶性络合物，影响了柚皮苷的含量测定。实验发现该络合物在酸性溶液中能够迅速解离，可以避免对柚皮苷含量测定的干扰，故在测定复方中柚皮苷含量时，需用稀硫酸调节溶液pH至酸性。
【参考文献】
［1］国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1986：761，680.
［2］宋必卫，田薇，刘颖雪，等.槲皮素镇痛作用研究［J］.安徽医科大学学报，1994，29（3）：168.
［3］赵兴梅，徐光忠，李建利，等.川牛膝和怀牛膝的现代药理研究概况［J］.华西药学杂志，2004，19(3)：205.
1．1仪器UV－2201紫外可见分光光度计（Shimadzu）；倾斜式高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；PB203－N电子精密天平（MettlerToledo仪器上海有限公司）；AJ150L电子精密天平（MettlerinSwitzerland）。
1．2试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿DiospyrosKakiL．f．；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：080－9303）；AlCl3·6H2O等均为分析纯。
2方法与结果
2．1因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间3种因素进行考察，每种因素分为3个水平，结果见表1。
2.2供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g共9份，按照表2L9（34）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至100ml或200ml量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（0．45μm），作为供试品溶液。
表1正交设计因素水平（略）
表2L9（34）正交实验设计及结果分析（略）
2.3对照品溶液的制备精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品0．0825g于100ml量瓶中，70％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液0．825mg·ml－1。
2.4显色试剂及测定波长的选择Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色法［4］：精密吸取芦丁标准液0．5ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至25ml量瓶中，分别加入5％NaNO21．0ml，放置6min，然后加入10％Al（NO3）31．0ml，混匀，放置6min，再加入4．3％NaOH10ml，用70％乙醇定容至刻度，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。
AlCl3显色法［5］：精密吸取芦丁标准液0．1ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至10ml量瓶中，分别加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。
比较上述两种显色法，用Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色后，明显生成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而AlCl3显色后，芦丁标准液的λmax＝410nm，3个样品溶液的λmax＝400～410nm，故选择AlCl3显色后410nm测定吸光度。
2.5显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液0．3ml和供试液4＃1．0ml，依法显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表3，吸光度RSD分别为0．2％和0．3％，可见芦丁标准液和供试液4＃显色后4h内基本稳定。
2.6线性关系考察取芦丁标准液1．0ml置25ml容量瓶中，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，分别取1．0，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0ml置10ml量瓶中，加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，结果见表4。线性回归得标准曲线：A＝5．6×10－3C＋5．7×10－3，R＝0．9999，线性范围为33．0～132．0μg／ml。
2.7样品测定分别取9份供试品溶液适量至10ml量瓶中，加0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，换算为总黄酮含量（mg·g－1），如表2所示，极差分析得最佳提取工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。
表3显色稳定性考察（略）
表4芦丁标准曲线的制作（略）
2.8验证实验精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g5份，置于100ml锥形瓶中，按照A2B2C3条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至200ml量瓶中，80％乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表5，其平均值为101．821mg·g－1，RSD＝2．1％，表明此条件重复性良好。
表5验证实验结果（略）
3结论与讨论
3.1结论柿叶乙醇提取最佳工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。经验证样品中总黄酮平均含量为101．821mg·g－1（RSD＝2．1％），表明正交实验结果可靠。
3.2讨论
3.2.1预实验采用同一方法测定柿叶水提物和乙醇提取物中总黄酮含量，结果前者显著低于后者，根据参考文献及上述预实验结果，采用乙醇作为提取溶剂。
3.2.2AlCl3显色方法与参考文献比较未采用70℃水浴，因为实际测定两者差异不大，不采用水浴可以减少测定步骤，减小误差。
3.2.3预实验采用22～48目柿叶粉回流提取，发现有爆沸现象，改为最粗粉10～22目。
【参考文献】
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此工艺采用醇提法进行，生产过程中使用的酒精需要回收并循环使用，其具体工艺流程为：首先将原药材进行预处理后，投入到提取罐中，加入一定量酒精回流提取，然后收集提取液；提取液再经过浓缩器进行浓缩，将浓缩液进行喷雾干燥后即制成中间体。物料衡算是设备选型的依据，决定生产空间大小，在物料衡算基础上进行合理生产安排，是防止多品种生产时产生交叉污染的基本手段之一。进行物料衡算之前，首先应了解车间的年生产任务、生产班制、每班工作时间以及年生产时间等，根据计算可以得出此工艺原材料消耗量以及每个阶段中间品的产量，最后选择适合生产能力的设备（提取罐、浓缩设备、干燥设备等）进行匹配。
2平面布局工艺设计
以某中药提取车间为例，根据提取车间的自身特点，将车间平面设计成矩形，这样便于工艺设备的合理布置，便于安排通道及出入口，且能提供较多自然采光和自然通风的墙面。
2.1垂直布局设计，节省占地面积，合理利用空间
从整体布局上考虑，以提取罐为中心，采用垂直布局模式，将整个车间分为3层（局部有4层），第1层主要由酒精回收间、出渣间以及公用工程房间组成，第2层主要为前处理间、提取操作间及生产辅助间，第3层为喷雾干燥区（D级洁净区），主要进行浸膏处理操作。提取车间所使用的酒精回收装置尺寸较大，高度较高，因此将酒精回收单元分3层布置，第1层布置酒精回收釜，第2层布置酒精储罐，第3层夹层布置冷凝器、冷却器等。在提取与出渣的设计上也采用垂直布局的方式，将提取操作区与出渣区分层布置，一方面保证出渣口的高度，便于药渣的清除和转运，另一方面减少出渣操作对整个生产区的污染。
2.2人、物流分开设置，避免交叉污染
物流主入口设在东侧，靠近前处理区，原药材通过货梯运至第2层切断、净制、挑拣间进行前处理，然后至提取操作间进行提取，提取液经浓缩、喷雾干燥后制成中间体。如此将人、物流分开设置，有利于避免造成污染和混淆。
3工艺管道布置
提取车间的工艺管道包括提取罐料液自循环管道、提取液输送管道、浓缩液输送管道、酒精输送管道等。提取车间的工艺管道布置在符合GMP要求的前提下进行设计。管道设计可以采用明敷方式，以减少投资，并有利于安装、操作和检修。设计时，尽量做到管线短捷，管道必须有交叉和拐弯时，应避免产生死角和盲管等。图3为某提取车间的工艺管道布置图，提取设备、泵以及储罐分别沿南北两侧墙布置，中间留出运输通道和操作空间，其工艺管道大多沿墙、地面或楼面进行敷设，多条管路集中布置，并平行敷设，做到整齐、美观、易操作。管道上标注有管道等级、管道号、标高、物料名称等。不同管道的相互位置，管道与墙壁、管道与管道之间的距离均参照化工管道相关设计规范进行确定。
4具体问题及解决方案
4.1投料操作不方便及解决方案
提取操作间的常规做法是将提取罐的罐耳挂在楼板上，投料口高出地面的高度给投料操作带来了困难，需要搭建钢平台作为投料层，每次进行提取操作前，操作人员先上至钢平台，再将物料投入提取罐，这种做法的缺点是操作不方便，且操作周期长。为了解决上述问题，在设计时可考虑在提取操作间局部做降板，如图4所示，使提取罐的投料口处基本与地面平齐，这样操作人员可直接将物料投入其中。改进后的操作层兼顾了2种功能，即投料和操作可以同时进行，这样使操作更加快捷，效率得到提高。
4.2出渣间污染及解决方案
中药提取后的药渣排放是中药提取车间的一大难题。2010版GMP中指出：中药提取后的药渣如需暂存、处理时，应当有专用区域。为了更好地避免出渣间出现污染问题，设计时应注意以下几点：
（1）出渣间与其他功能间最大限度隔离，直接对外开门，将其对生产区的污染风险降至最低。
（2）出渣间不再设计贮渣功能，药渣卸下后立即运走，每次出渣后立即进行全面彻底清洗。借助药渣压缩设备，将药渣卸到料斗内，由压缩机挤压至原体积的1/2，挤压所产生的污水由排污管道排入污水管，这样不仅避免了药渣和药渣滴水造成的二次污染，同时由于药渣体积压缩而大幅降低了运输费用。
（3）出渣间的墙面、地面宜采用瓷器类物质贴面，既便于清洗，又能避免提供霉菌附着基。
（4）在满足出渣口能打开及方便出渣车进出的前提下，出渣高度尽可能降低，避免飞溅的渣水造成二次污染。
5结语
【关键词】小檗碱提取工艺黄连黄柏三颗针正交实验
Abstract:Beingthecommonmedicine,berberinehasextensiveapplicationsinclinicalpharmacy.Therehavebeenmanystudiestoimprovetheyieldingrateofberberineinrecentyears.Thearticlesumsupstudiesontheextractingtechnologyofberberine.
Keywords：Berberine;Extractiontechnology；RhizomaCoptidis；PhellodendronamurenseRupr；Berberis；Orthogonaltest
小檗碱又称黄连素，广泛分布在植物界，大约有4个科10个属植物都已发现有小檗碱存在。小檗碱是黄色针状晶体，表现为季铵型、醇型3种互变异构体，其中以季铵碱型最稳定。小檗碱能缓慢溶解于冷水（1∶20）或冷乙醇（1∶100），在热水或热乙醇中溶解度比较大，难溶于丙醇、氯仿或苯，盐类的溶解度都比较小，硫酸盐在水中的溶解度约为1∶30，盐酸盐微溶于冷水。小檗碱可从三颗针、黄连、黄柏等植物中提取。由于黄连生长缓慢，价格较高，黄柏来源也较少，现我国主要应用三颗针作为提取原料。
小檗碱是临床上一种常用的广谱抗菌药，主要用于菌痢、胃肠炎、痈肿等细菌性感染。现代研究证明小檗碱有抗肿瘤、抗心率失常、降压、降血糖等作用，在临床上有越来越广泛的应用，需求量日益增加。为提高小檗碱提取效率，近些年来对小檗碱提取工艺的研究很多，本文对这一方面作一综述。
1酸水法提取小檗碱
酸水法是目前工业生产提取小檗碱常用的方法。从三颗针中提取小檗碱,常用多倍量的0.3%硫酸水溶液浸泡24h，滤液用石灰乳调pH值至12，过滤，滤液用盐酸调pH值到2～3,再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,放置过夜,抽滤得盐酸小檗碱粗品［1］。或用0.5%的硫酸水溶液冷浸提取,酸水液用石灰乳调pH值到7左右,滤液浓缩用盐酸调pH值到2～3，再加入6%左右的精制食盐,使食盐完全溶解,过滤，沉淀溶于热水，加石灰乳调pH值到8.5～9趁热过滤,滤液再用盐酸调pH值到2～3，放冷过滤得盐酸小檗碱粗品［2］。廖志新等［3］以产于青海等地的三颗针为原料，采用正交实验法，对酸水法提取盐酸小檗碱的生产工艺进行研究，找出了最佳的提取工艺。根据实验结果，盐酸用量达到pH=1，浸提剂量也应在浸透材料量之上超出两倍，食盐用量应使提取液浓度达到5%～7%；浸提总时间应达到12～24h，浸提剂温度控制在80℃至沸点之间；浸提剂浓度（即硫酸浓度）为0.5%～0.7%最佳。黄祖良等［4］报道从十大功劳根粗粉中提取小檗碱,用0.5%左右硫酸溶液浸泡24h,次日,把浸泡液倾出,浸泡液(收集8～10倍量浸泡液,后50%留作下一批套用),用浓盐酸调pH值到1.5左右,按10%(W/V)的量加入精制食盐放置过夜,滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干,盐酸小檗碱提取率为1.23%。据庞小雄等［5］报道，采用正交实验优选三颗针中小檗碱的提取工艺，根据盐酸小檗碱的提取条件，选定浸泡时溶剂的用量，稀硫酸的浓度，石灰乳沉淀的pH值两个因素，确定最佳工艺溶剂的量是药材的16倍，稀硫酸浓度为0.2%,加石灰乳沉淀杂质时的pH值为9,精制时调酸的温度是60℃。肖美凤等［6］报道,用正交实验法对黄连中小檗碱提取工艺进行优选,采用分光光度法测定盐酸小檗碱的含量,其最佳提取工艺是0.4%硫酸水溶液,16倍量的溶剂,石灰乳调pH值到10,精制时加入酸的温度不低于50℃,该工艺经济实用,小檗碱提取率较高。孙波等［7］就水提法部分进行正交优选，确定水提法用水煎煮3次，3.5h,加水量14倍为最佳工艺。预实验中,结果表明用0.5%酸水作溶媒提取最佳。吕霞［8］报道用0.5%硫酸水溶液提取黄连中小檗碱，分别采用索氏提取、超声提取和浸渍提取，HPLC法分析小檗碱浓度分别为16.401，14.246，13.415μg/ml。方阵等［9］优选黄连的最佳酸水提取工艺为2%的盐酸,12倍量的水，回流3次，1.5h/次。
2石灰乳法提取小檗碱
石灰乳法也是当前工业生产上常用的方法。如用渗漉法从黄柏中提取小檗碱，称取黄柏粗粉200g置大蒸发皿中，加入石灰乳搅拌均匀，常法装渗漉桶，加入饱和石灰水浸泡6h后渗漉（pH值在10以上），控制流速5～6ml/min，收集渗漉液2000ml，加入渗漉体积7%（质量浓度）的固体食盐，搅拌后放置过夜，过滤，沉淀，用热水溶解，趁热过滤。滤液加盐酸调pH值为2，放置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水洗至中性，抽干后于80℃下干燥，即得盐酸小檗碱粗品［10］。黄祖良等［4］从十大功劳中提取小檗碱，用石灰乳适量搅拌均匀，用水浸渍24h后用水渗漉，收集渗漉液适量，用浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱提取率为1.17%。石灰乳法用大量的石灰乳可能引起成分损失，也浪费盐酸，增加了生产成本。尹蓉莉等［11］从黄柏中提取盐酸小檗碱,比较几种传统的提取方法,有酸水法、石灰乳法和醇提法等,并加以改进,结果证明,石灰乳法提取效率优于其他方法。
3乙醇法提取小檗碱
通常黄连根粉用乙醇温浸，回收大部分乙醇，剩余乙醇浓缩液放置，过滤，滤液加盐酸、沉淀、放置，过滤得黄色沉淀为盐酸小檗碱粗品［12］。或用加热回流提取，称取一定量的黄连切碎，放入250ml圆底烧瓶中用100ml乙醇作提取溶媒，热水浴加热回流30min，放置浸泡1h，抽滤，滤渣重复上述处理两次，合并3次滤液，减压蒸出乙醇直到为棕红色糖浆状。在棕红色糖浆状物中加入1%醋酸（约30～40ml）加热使溶解，抽滤以除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊为止，放置冷却，最好用冰水冷却，即有盐酸小檗碱析出，抽滤，结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，干燥，烘干称重。席国萍等［13］报道，设计用乙醇法提取小檗碱的正交实验方案，通过方差分析，得到黄连中小檗碱最佳提取工艺为：温度为60℃，9倍体积50%乙醇，提取两次，1h/次，小檗碱提取率为91%以上，平均回收率为97.38%，相对标准偏差为1.48%。黄祖良等［4］研究用75%乙醇回流提取十大功劳根茎粗粉至无色，提取液减压回收乙醇后，用热水溶解，趁热过滤，滤液中加浓盐酸调pH值为1.5左右，按10%（W/V）加入食盐放置过夜，滤取析出的盐酸小檗碱粗品晒干，盐酸小檗碱粗品提取率为3.47%，粗品中盐酸小檗碱含量为38.96%，盐酸小檗碱的提取率为1.35%。吕霞［7］报道用95%乙醇为溶媒，采取索氏提取法，HPLC法分析小檗碱浓度为17.504μg/ml，用95%乙醇、75%乙醇浸渍提取，所得小檗碱的浓度分别为12.120，14.465μg/ml，可见索氏提取明显优于浸渍。刘圣等［14］用正交实验法考察黄连中小檗碱最佳提取工艺为：溶剂为6倍量80%乙醇，乙醇中硫酸加入量为0.25%，提取时间为1.5h/次，提取次数为3次，以该工艺制备的盐酸小檗碱精制品含量在90%以上,适合工业化生产。张乐佳等［15］报道黄连总碱的浸出量与溶剂量，溶剂种类，浸提时间等因素有关,黄连最佳提取工艺是：50%乙醇回流提取3次,每次10倍量溶剂，提取2h。罗音久等［16］用正交设计筛选醇提工艺的最佳条件是黄连须粗粉中加入5%的中药提取因子，37℃恒温浸泡6h，乙醇连续回流3次，1h/次，总加醇量22倍，所得盐酸小檗碱总量最高，为3.81%。黄传俊等［17］采用正交实验法，以黄连提取的收膏率和盐酸小檗碱提取量为考察指标，利用HPLC法测定盐酸小檗碱的含量，结果表明最佳提取工艺是黄连粗粉加8倍量60%的乙醇回流提取3次，1h/次。邢俊波等［18］报道用正交法优选黄柏中小檗碱的提取工艺是7倍量的70%乙醇热回流提取两次，2h/次提取率最好。张学顺等［19］报道比较黄连不同提取方法所得提取液的整体成分及小檗碱的含量，确定最佳提取条件，采用反向色谱柱，以乙腈磷酸二氢钾溶液（47∶53）1000ml加入SD1.7g为流动相，结果显示，75%乙醇索氏提取法所得小檗碱含量最高。
4超声波提取小檗碱
常规提取小檗碱一般费时费力，效率低，而借助于超声技术却可得到显著效果。超声波提取技术是利用超声波产生的强烈振动，高的加速度，加速药物有效成分进入溶剂，从而提高了提出率，缩短了提取时间，并且免去了高温对提取成分的影响。
郭孝武［20］报道应用超声技术从黄连根茎中提取黄连素的工艺参数与常规浸泡法相比，超声提取具有省时、提出率高等优点。在研究从黄连根茎中提取小檗碱时，分别对超声波处理、超声波频率及硫酸浓度等进行了观察，结果表明用20kHz超声波提取30min浸泡24h，提取率相同（8.12%）。核磁共振波仪对提取产物研究说明超声波对小檗碱结构无影响。超声波用于从黄连中提取小檗碱的常规碱性浸泡工艺中，超声波提取30min所得到的小檗碱提取率比碱液浸泡24h高50%以上［21］。吕霞［7］报道用超声波提取法从黄连中提取小檗碱，称取黄连粗粉2.0g四份，分别用纯水，95%乙醇，75%乙醇，0.5%H2SO4溶液超声提取30min，过滤，滤渣按上述方法再重复提取两次。实验结果用HPLC法分析了各提取液的小檗碱浓度表明用75%乙醇超声提取所得的小檗碱浓度最高（15.642μg/ml），0.5%H2SO4溶液处理次之，95%乙醇超声提取小檗碱浓度最低（11.3426μg/ml）。为了考察超声提取的小檗碱结构是否有变化，以常规浸泡法提取小檗碱成分作对照，用红外谱仪扫描，核磁共振波谱仪测得两种提取法所得的小檗碱样品的光谱和氢图谱图一致，说明超声波提取未破坏小檗碱成分的结构［22］。吴宝华［23］报道，黄柏用甲醇煮后用超声波处理提取小檗碱，时间短，产率高。鲁云博等［24］用HClCH3OH(1∶10)溶液超声20min的提取方法，可以获得较高的盐酸小檗碱提取率。岑志芳等［25］采用超声波法考察川黄柏中小檗碱的提出率，优选最佳的超声频率。以饱和的石灰水为溶媒，分别以不同频率的超声波从川黄柏中提取盐酸小檗碱并与浸渍法比较，结果用50kHz超声波提取3次，20min/次，提取率最高，比浸渍高近1倍。
5微波法提取小檗碱
微波指频率在300～300000MHZ之间的电磁波，其提取机制是，一方面通过微波照射，使植物细胞破裂，细胞内的有效成分自由流出转移至温度较低的提取介质中；另一方面，微波产生的电磁场加速被提取组分由物料内部向提取溶剂界面的扩散速率。邓远辉等［26］用微波法提取黄连中的小檗碱，以干固物和小檗碱含量测定值为指标，比较微波和回流两种方法。干固物测定结构显示，在单位时间内微波处理较回流好，具有明显优势；以小檗碱含量为指标，结果显示回流提取小檗碱含量高于微波提取。郭锦棠等［27］用微波索氏联合工艺提取小檗碱。选用不同粒度的黄连药材，精确称量10g，加入一定量的蒸馏水，混合均匀，在变频微波炉中，以不同水平的微波功率，辅助时间进行微波照射，每份样品待其冷却后，重复照射1次。微波预处理后，在索氏提取器中以不同水平的提取溶剂用量与提取时间进行提取，将提取液静置过夜，取上清液加盐酸调pH值为2，然后加入18%的食盐水，将生成的沉淀静置一段时间后过滤，水洗后放入电热鼓风干燥箱，在60～80℃加热干燥，得到盐酸小檗碱粗品，计算收率。通过正交实验优选条件为，微波功率520W，（80%功率档），辐照时间1.5min×2次，基质含水量20ml，粒度为中粒，提取溶剂用量100ml，提取时间4h，重复实验3次，盐酸小檗碱粗品平均收率5.634%。实验表明，微波-索氏联合工艺比单用索氏提取得到的小檗碱收率明显要高，与传统提取方法比，提取效率高，无需过滤，工艺简单。
张海容等［28］用正交法优化微波萃取条件，与传统的酸碱法浸提小檗碱比较研究，确定工艺条件：80℃萃取温度，固液比为1∶15,时间1.5min,传统溶剂法萃取温度70℃，固液比为1∶20,时间24h,与稀硫酸浸泡提取比，微波萃取工艺提取时间大大缩短，产量可提高30%，操作简便，省时节能易于控制。
6酶法提取小檗碱
酶工程技术是近几年来用于重要工业的一项生物工程技术。通过酶反应温和地将植物组织分解，加速有效成分的释放提取，选用相应的酶可将影响液体制剂澄清度的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解去除，并且针对根中含有脂溶性成分多，通过葡萄糖苷酶或转糖苷酶，使脂溶性成分转化成水溶性糖苷类，酶反应提取温度低，可较大幅度地提高得率。例如，马田田［29］用黄柏提取小檗碱之前用纤维素酶进行预处理，可提高小檗碱收率，与未加酶的提取进行比较，有显著性差异。张福维等［30］报道用纤维素酶预处理黄柏提取盐酸小檗碱，收率比不加酶时高28%，其最佳的实验流程为：10g黄柏加入80mlpH4.5柠檬酸缓冲溶液，50℃恒温6h酶解，过滤，滤液中加入0.3mlH2SO4放置10h过滤，滤液中加入石灰乳调pH8～9，过滤，滤液用盐酸调pH值到1.5，向溶液中加入食盐至8%，放置5h，过滤得盐酸小檗碱粗品。梁柏林，周民杰［31］用正交实验法研究酶法提取小檗碱的最佳工艺条件，确定酶解黄连的最佳工艺条件：温度40℃，时间90min，pH4.0,酶用量30mg/g；酶提取工艺比传统乙醇法提小檗碱产率提高49%。马桔云等［32］选用黄连提取小檗碱研究了加酶组和未加酶组对有效成分小檗碱提取的影响，新工艺比原工艺只是多了一个向其中加入纤维素酶的酶解过程，但这两种工艺提取的小檗碱含量有显著差异，而提取的成分一致，因此，考虑是否将新工艺用于黄连提取的工业化中。
7微量法提取小檗碱
微型化学实验是近年来国内外迅速发展的一种实验新方法，有用量少，经费少，环境污染小，安全性好，时间短等优点。据报道［33］用微量法提取黄柏中的小檗碱与常规化学实验相比，只是产率略低。具体数据见表1。表1常规化学实验与微型化学实验比较（略）
8半仿生提取小檗碱
半仿生提取法，是指从生物药剂学的角度，模仿口服药物及其在胃肠道的转换过程，采用一定pH的酸水和碱水依次连续提取，目的是提取含指标成分高的活性混合物，它与纯化学观点“酸碱法”是等同的，又因为此种提取方法的工艺条件要适应工业化生产的实际，不能完全与人体条件完全相同，仅半仿生而已，故称“半仿生提取技术”。这种提取方法的特点是可以提取和保留更多的有效成分，能缩短生产周期，降低成本。
林慧彬等［34］以小檗碱的含量为指标，采用半仿生提取法，对黄连解毒汤的最佳药材组合方式进行筛选，优化了组合配伍。张学兰等［35］以小檗碱，总生物碱，干浸膏量为指标对黄柏做半仿生提取法和水提取法相比较，结果表明，半仿生提取液明显优于水提取液。
9超临界萃取提取小檗碱
超临界萃取是今年来逐步发展起来的一种现代提取分离技术，主要是利用二氧化碳在超临界温度下具有流体的性质来提取低极性成分，通过加入少量极性稍大的溶剂作为夹带剂，提高溶剂的极性扩大提取成分的极性范围。日本学者系川秀治等［36］早在20世纪80年代就以TLC为指标，用超临界萃取的方法对黄连有效成分进行了提取。齐艳宁［37］也报道，通过实验研究，超临界萃取的方法与传统溶剂的提取方法相比，有效成分高度浓缩，收率高，药理效果好，且毒性降低。
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1．1材料、试剂和仪器设备自贺州富川脐橙果园购脐橙果实，取新鲜果皮于鼓风干燥箱内65℃恒温烘干至恒重，粉碎后过40目筛备用。甲醇、无水乙醇、硫酸铵均为国产分析纯，以上试剂均未经过纯化处理。橙皮苷标准品（成都艾科达化学试剂有限公司，纯度≥98％）。FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），FA1004电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司），40目分样筛（浙江上虞市五四纱筛厂），恒温水浴锅B220（上海亚荣生化仪器厂），SHZD（III）型循环水式真空泵（河南巩义市予华仪器有限公司），SY300超声波提取仪（上海宁商超生仪器有限公司，功率300W，频率40KHz），TU1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），DHG9140A变热恒温鼓风干燥箱（西斯百瑞仪器有限公司）。
1．2试验方法
1．2．1标准品溶液的制备准确称取橙皮苷标准品5．0mg置于10mL烧杯中，加甲醇溶解完全后移入50mL容量瓶中，用甲醇润洗烧杯3次并移入容量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得浓度为0．1mg／mL的橙皮苷标准液。
1．2．2橙皮苷浓度吸光度标准曲线的绘制用移液管准确吸取橙皮苷标准液0．5、1．0、2．0、4．0、6．0、8．0mL分别置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，以甲醇作为空白参比，在283nm处测量吸光度。以吸光度为纵坐标，橙皮苷标准液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1．2．3乙醇／硫酸铵双水相体系的制备将一定浓度的硫酸铵水溶液加入无水乙醇中，通过改变乙醇与水的体积比（硫酸铵用量为0．30g／mL）来形成不同的双水相体系（乙醇和无机盐形成双水相的机理可能是盐溶液与有机溶剂争夺水分子形成缔合水合物的结果）。本试验所选择的双水相体系中乙醇初始体积与水初始体积之比为0．43（V／V），硫酸铵用量为0．30g／mL。
1．2．4样品中橙皮苷的乙醇／硫酸铵双水相超声提取及含量测定准确称取干燥脐橙皮粉2．0g置于100mL锥形瓶中。按一定料液比加入由不同醇水比和硫酸铵浓度配制的乙醇硫酸铵双水相体系中，在一定温度下超声提取一定时间，真空抽滤后滤液于分液漏斗中静置，分层，取上层乙醇液于50mL容量瓶中用30％乙醇定容，于283nm处测量吸光度，通过标准曲线方程求出乙醇液中橙皮苷浓度，然后计算脐橙皮粉中橙皮苷的得率（提取所得橙皮苷与原料的质量百分比）。
1．2．5乙醇／硫酸铵双水相超声法提取工艺试验的设计单因素试验。⑴料液比试验：准确称取干燥脐橙皮粉末2．0g，按料液比1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸铵浓度0．30g／mL配制的双水相溶液，在60℃下超声提取200秒后测定橙皮苷含量。⑵超声时间试验：准确称取干燥脐橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸铵浓度0．30g／mL配制的双水相溶液，在60℃下分别超声提取100、150、200、250、300秒后测定橙皮苷含量。⑶超声温度试验：准确称取干燥脐橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比0．43（V／V）、硫酸铵浓度0．30g／mL配制的双水相溶液，分别在40、50、60、70、80℃温度下超声提取250秒后测定橙皮苷含量。⑷醇水比试验：准确称取干燥脐橙皮粉末2．0g，按料液比1∶30（m／V）加入醇水比分别为0．35、0．4、0．5、0．6、0．7（V／V）、硫酸铵浓度0．30g／mL配制的双水相溶液，在70℃下超声提取250秒后测定橙皮苷含量。正交试验设计。在单因素试验的基础上，以料液比、超声处理时间、超声温度条件、醇水比等4个因素，各取3个水平，进行L9（34）正交试验，寻找乙醇／硫酸铵双水相超声法提取脐橙皮橙皮苷的最佳工艺条件。然后，准确称取3份干燥脐橙皮粉末各2．0g，按最佳工艺条件进行提取，计算此法提取橙皮苷的平均得率。
2结果与分析
2．1标准曲线根据测定结果绘制的标准曲线，得到回归曲线方程：狔＝42．881狓＋0．0478（犚2＝0．9996）。表明，橙皮苷浓度在0．005～0．080mg／mL范围内，其吸光度（283nm）与浓度呈良好线性关系。
2．2提取工艺
2．2．1单因素试验料液比对橙皮苷得率的影响：试验结果看出，料液比在（1∶20）～（1∶30）时，随着提取液用量增大，橙皮苷得率逐渐增大，但超过1∶35后得率增大趋于平缓。超声时间对橙皮苷得率的影响：试验结果看出，随超声时间的增加，橙皮苷得率呈上升趋势，在250秒时得率为1．79％，此后，再延长超声时间得率增大效果不明显。超声温度对橙皮苷得率的影响：随着提取温度的升高，橙皮苷的得率逐步增大，温度在70℃时橙皮苷得率达到最大，为1．70％；温度超过70℃时橙皮苷得率下降。分析认为，随着提取温度的升高，提取液扩散速度增加，使浸提橙皮苷的速度加快，橙皮苷的得率也逐步增大，但温度超过70℃时，杂质溶出量会相应增大，增大溶液的黏度，影响橙皮苷物质的溶出，反而导致得率下降。醇水比对橙皮苷得率的影响：随醇水比的增大，橙皮苷能更充分溶出，当醇水比为0．5（V／V）时，橙皮苷得率最高，为2．20％；醇水比高于0．5后，橙皮苷溶出量减少。分析认为，橙皮苷中含酚羟基，根据相似相溶的原理，非极性化合物易溶于非极性溶剂，极性化合物易溶于极性溶剂，因此，较高的醇水比有利于橙皮苷的提取，但醇水比过高时增加了醇溶性物质的溶出，使溶液黏度增大，反而会导致橙皮苷的溶解度降低，得率下降。
2．2．2正交试验试验结果看出，影响橙皮苷得率的各因素主次顺序为醇水比＞料液比＞温度条件＞超声提取时间，乙醇／硫酸铵双水相超声法提取脐橙皮橙皮苷的最佳工艺条件为犇3犃3犆3犅2，即醇水比0．6（V／V）、料液比1∶35（m／V）、温度75℃、超声时间250秒（见表2）。验证试验表明，在最佳工艺条件（犇3犃3犆3犅2）下，乙醇／硫酸铵双水相超声法提取脐橙皮橙皮苷的平均得率为4．23％。
3小结
同时也要看到，当前文艺评论工作仍然存在一些不容忽视的问题，文艺评论与文艺创作繁荣发展的总体态势还不相适应、不相协调，文艺评论对文艺领域的新特点、新动向缺乏及时的关注和有效的引导;文艺评论的针对性、实效性和说服力、感染力还不够强，富有真知灼见的文艺评论作品还不够多;恶意炒作、有偿吹捧和低俗渲染等不良评论现象还时有出现，以及文艺评论阵地亟待拓展，文艺评论队伍后继不足、人才匮乏等，这些问题迫切需要引起高度重视，切实加以解决。
文艺评论对文艺作品、文艺活动、文艺现象做出价值判断，是引导群众文艺鉴赏的重要因素，是推动文艺创作繁荣的重要力量，是党领导文艺工作的重要方式。只有切实加强文艺评论工作，不断为优秀作品的诞生鸣锣开道，为优秀人才的涌现呐喊助威，才能更好地推动文艺蓬勃发展。只有进一步发挥文艺评论平等交流、自由讨论的独特优势，帮助人民群众在数量众多的文艺作品中认识优劣、区分高下、甄别美丑，才能更好地在潜移默化中影响受众的价值判断和审美追求。面对经济全球化和世界文化多元化的形势，文艺要肩负起建设社会主义核心价值体系的神圣职责，为提高我国文化软实力做出应有贡献，就必须更好地发挥文艺评论在辨析思想、激浊扬清、去伪存真等方面的重要作用，引导人们树立中国特色社会主义共同理想和正确的世界观、价值观、人生观，不断增强社会主义先进文化的吸引力和感召力。总之，我们一定要从兴起社会主义文化建设新高潮、推动社会主义文化大发展大繁荣的战略高度，充分认识做好文艺评论工作的重要意义，不断增强责任感使命感，努力用改革的精神、创新的思路、发展的办法，切实提高文艺评论的水平。
第一、牢牢把握文艺评论的正确方向。始终坚持先进文化前进方向，体现时代的发展趋势，引领文艺的发展进步，是文艺评论工作者义不容辞的神圣使命。要坚持以马克思主义为指导，认真学习毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想，深入贯彻落实科学发展观，努力掌握马克思主义的立场、观点、方法，运用辩证唯物主义和历史唯物主义认识历史、观察社会、分析问题、评价作品，在历史的演变和实践的发展中努力把握其内在规律，在纷繁复杂的现象中认识事物的本质，实现科学的理论指导与崇高的学术追求的有机统一。要全面准确地贯彻执行党的各项文艺方针政策，自觉遵循为人民服务、为社会主义服务的方向和百花齐放、百家争鸣的方针，坚持贴近实际、贴近生活、贴近群众，弘扬主旋律，提倡多样化，坚持把社会效益放在首位、实现社会效益和经济效益相统一，促进社会主义文艺事业大团结大繁荣大发展。在文艺评论活动中，要尊重艺术规律，尊重作家艺术家的创造性劳动，坚持重在建设、正面引导为主，在文艺创作上提倡不同风格、样式、流派的自由发展，在学术研究上提倡不同观点和学派的自由讨论，努力形成既坚持原则、又团结和谐的生动局面，把各方面的智慧和力量凝聚到繁荣文艺的共同事业中来。各级宣传文化部门要把握好文艺评论的导向，探索和完善运用文艺评论手段调节导向的机制，妥善处理文艺评论中出现的问题。要科学区分政治问题、学术问题与艺术问题的界限，属于学术和艺术性的问题，要切合实际地开展科学健康说理的文艺评论，对事关政治方向、政治原则的错误观点，要旗帜鲜明地予以反对和批驳。
第二、进一步完善具有中国特色和时代特征的文艺评判标准。文艺评判标准是文艺评论中的一个关键问题。当前，要继续大力推进马克思主义文艺理论研究，深入阐释马克思主义基本原理，把基础理论研究和现实问题研究结合起来，把马克思主义中国化最新成果运用到文艺评论实践中，加强文学、艺术学学科和教材建设。要把社会主义核心价值体系作为确立文艺评判标准的基本要求，大力开展积极向上的文艺评论活动，着力推出准确鲜明、见解深刻、有说服力的评论文章，生动地告诉人们什么是真善美、什么是假恶丑，什么是值得肯定和赞扬的，什么是必须反对和否定的，让人们在美的享受中受到鼓舞，在情感的共鸣中得到启迪，在心灵的震撼中获得教益。要从当代文艺实践出发，结合中华民族的价值观念和审美习惯，认真研究国际通行的文艺规则，建立和完善既具有优秀中华文化的丰富内涵，又具有鲜明时代特征的文艺评判标准，以增强我国文艺在国际上的话语权和影响力，维护中华文化在国际上应有的地位，切实保障国家文化利益和文化安全。
第三、文艺评论要始终坚持面向群众、服务群众。人民群众是文艺欣赏的主体，也是文艺评论接受的主体。这些年我们大力倡导贴近实际、贴近生活、贴近群众，这不仅仅是对作家艺术家提出的要求，也是对文艺评论工作者提出的要求。广大文艺评论工作者应当双脚站在土地上，走到人民群众中去，走到文艺创作者中间去，积极主动地融入当代群众和作家艺术家的精神世界，在面向群众、服务群众中实现文艺评论的大众化、通俗化。要不断研究人民群众精神文化生活的新特点新趋向，密切追踪人民群众审美需求的新变化新规律，从火热的现实生活中吸收和补充营养，听取人民群众对文艺创作、文艺活动的意见和建议，真正使我们的评论作品接受群众的检验。各级各类媒体要为广大基层群众开展文艺评论提供园地，多发表来自基层的评论作品，多刊登短小精悍、简洁明快的评论文章，多使用来自普通群众的质朴生动、率真中肯的评论语言。各类文艺评论组织要改进方式方法，扎实开展形式多样、内容丰富的影评、剧评、书评、乐评等活动，不断提高基层群众的鉴赏和评论水平。
第四、不断增强文艺评论的创造力、吸引力和感召力。创新是文艺评论的生命之魂、魅力之本、动力之源。要立足中国特色社会主义文艺实践，放眼世界文化发展潮流，认真研究文艺创作的新动态、文艺活动的新变化，对社会生活和人类本质始终保持深刻独到的理解把握，从广阔的创作实践中选取评论题材，从丰富的文艺现象中提炼真知灼见，用逻辑的魅力和理论的说服力打造时代的评论精品。要始终坚持与时俱进，广泛吸收借鉴社会科学和自然科学的优长，改进研究方法，提高评论水平，努力创造出能够充分表达时代审美特征的概念与范畴，创造出具有鲜明时代风貌的评论文体和语言，创造出体现中华民族深厚文化底蕴的评论风格，使我们的评论作品深入浅出、通俗流畅，让群众爱读、爱听、爱看。
第二、进一步完善具有中国特色和时代特征的文艺评判标准。文艺评判标准是文艺评论中的一个关键问题。当前,要继续大力推进马克思主义文艺理论研究,深入阐释马克思主义基本原理,把基础理论研究和现实问题研究结合起来,把马克思主义中国化最新成果运用到文艺评论实践中,加强文学、艺术学学科和教材建设。要把社会主义核心价值体系作为确立文艺评判标准的基本要求,大力开展积极向上的文艺评论活动,着力推出准确鲜明、见解深刻、有说服力的评论文章,生动地告诉人们什么是真善美、什么是假恶丑,什么是值得肯定和赞扬的,什么是必须反对和否定的,让人们在美的享受中受到鼓舞,在情感的共鸣中得到启迪,在心灵的震撼中获得教益。要从当代文艺实践出发,结合中华民族的价值观念和审美习惯,认真研究国际通行的文艺规则,建立和完善既具有优秀中华文化的丰富内涵,又具有鲜明时代特征的文艺评判标准,以增强我国文艺在国际上的话语权和影响力,维护中华文化在国际上应有的地位,切实保障国家文化利益和文化安全。
第三、文艺评论要始终坚持面向群众、服务群众。人民群众是文艺欣赏的主体,也是文艺评论接受的主体。这些年我们大力倡导贴近实际、贴近生活、贴近群众,这不仅仅是对作家艺术家提出的要求,也是对文艺评论工作者提出的要求。广大文艺评论工作者应当双脚站在土地上,走到人民群众中去,走到文艺创作者中间去,积极主动地融入当代群众和作家艺术家的精神世界,在面向群众、服务群众中实现文艺评论的大众化、通俗化。要不断研究人民群众精神文化生活的新特点新趋向,密切追踪人民群众审美需求的新变化新规律,从火热的现实生活中吸收和补充营养,听取人民群众对文艺创作、文艺活动的意见和建议,真正使我们的评论作品接受群众的检验。各级各类媒体要为广大基层群众开展文艺评论提供园地,多发表来自基层的评论作品,多刊登短小精悍、简洁明快的评论文章,多使用来自普通群众的质朴生动、率真中肯的评论语言。各类文艺评论组织要改进方式方法,扎实开展形式多样、内容丰富的影评、剧评、书评、乐评等活动,不断提高基层群众的鉴赏和评论水平。
第四、不断增强文艺评论的创造力、吸引力和感召力。创新是文艺评论的生命之魂、魅力之本、动力之源。要立足中国特色社会主义文艺实践,放眼世界文化发展潮流,认真研究文艺创作的新动态、文艺活动的新变化,对社会生活和人类本质始终保持深刻独到的理解把握,从广阔的创作实践中选取评论题材,从丰富的文艺现象中提炼真知灼见,用逻辑的魅力和理论的说服力打造时代的评论精品。要始终坚持与时俱进,广泛吸收借鉴社会科学和自然科学的优长,改进研究方法,提高评论水平,努力创造出能够充分表达时代审美特征的概念与范畴,创造出具有鲜明时代风貌的评论文体和语言,创造出体现中华民族深厚文化底蕴的评论风格,使我们的评论作品深入浅出、通俗流畅,让群众爱读、爱听、爱看。
第五、大力拓展文艺评论阵地。这是繁荣文艺评论的必由之路。我们必须进一步打开思路,采取切实有效的措施,搭建评论平台,拓宽传播渠道。要充分发挥报刊阵地的骨干作用。中央和省级党报要开辟版面,对重要文艺作品、文艺活动和现象进行深入评析,注意发挥好优秀文艺评论的示范和导向作用。专业文艺报刊要突出自身特点,树立品牌意识,着力提高文艺评论质量和水平,进一步增强对作家艺术家的影响力。都市生活类报刊要加大对优秀作品的宣传评介力度,注重思想内涵,提高文化品位。要加强电视文艺评论。中央电视台和有条件的省级电视台上星频道要开办文艺评论节目,精心组织、精心编排,办出质量、办出品牌。要适应现代传播发展的新特点,重视抓好网络文艺评论,鼓励和扶持一批重点文艺评论网站,支持文艺评论家开展公开、平等、善意、理性的网上评论,增强优秀文艺评论对广大网民特别是青少年的感染力和覆盖面。总之,要通过各方面的努力,为文艺评论搭建更大的展示平台,为健康说理的文艺评论提供更大的传播空间。
第六、培养造就一支高素质的文艺评论队伍。加强和改进文艺评论工作,关键在队伍,根本在人才。要加强文艺评论人才培养工作,在宣传文化系统“四个一批”人才培养工程中增加文艺评论人才的数量,着力培养中青年文艺评论领军人物。要把组织举办各种形式的文艺评论培训班制度化、经常化,充实和强化文艺评论专业教育,探索文艺界人民团体、文艺媒体、高校以及社科研究机构共同培养的新路子,努力造就一大批文学、影视、戏剧、美术、音乐、舞蹈、曲艺等各领域的评论专门人才。要进一步完善人才激励机制,对在文艺评论领域取得突出成绩的文艺评论家予以表彰奖励。有关部门要采取有效措施树立文艺评论家的威信,使优秀文艺评论家社会上受尊重、专业上有权威,并进一步提高文艺评论家的待遇,增加文艺评论的报酬。要加强行业自律和职业规范建设,倡导学术自由和社会责任的统一,倡导为文与为人的统一,秉笔直书、客观公正,以理服人、与人为善,对群众负责,对社会负责,对历史负责。各级文艺管理部门和人民团体要认真贯彻“双百”方针,尊重差异,包容多样,用民主协商、平等讨论的办法解决艺术上的问题,允许艺术探索过程中出现的偏差和失误,不求全责备,不以行政命令代替文艺评论。要多为文艺评论家办实事、办好事,充分调动他们的积极性主动性,努力形成团结融洽、生动活泼的良好局面。
第二、进一步完善具有中国特色和时代特征的文艺评判标准。文艺评判标准是文艺评论中的一个关键问题。当前,要继续大力推进马克思主义文艺理论研究,深入阐释马克思主义基本原理,把基础理论研究和现实问题研究结合起来,把马克思主义中国化最新成果运用到文艺评论实践中,加强文学、艺术学学科和教材建设。要把社会主义核心价值体系作为确立文艺评判标准的基本要求,大力开展积极向上的文艺评论活动,着力推出准确鲜明、见解深刻、有说服力的评论文章,生动地告诉人们什么是真善美、什么是假恶丑,什么是值得肯定和赞扬的,什么是必须反对和否定的,让人们在美的享受中受到鼓舞,在情感的共鸣中得到启迪,在心灵的震撼中获得教益。要从当代文艺实践出发,结合中华民族的价值观念和审美习惯,认真研究国际通行的文艺规则,建立和完善既具有优秀中华文化的丰富内涵,又具有鲜明时代特征的文艺评判标准,以增强我国文艺在国际上的话语权和影响力,维护中华文化在国际上应有的地位,切实保障国家文化利益和文化安全。
第三、文艺评论要始终坚持面向群众、服务群众。人民群众是文艺欣赏的主体,也是文艺评论接受的主体。这些年我们大力倡导贴近实际、贴近生活、贴近群众,这不仅仅是对作家艺术家提出的要求,也是对文艺评论工作者提出的要求。广大文艺评论工作者应当双脚站在土地上,走到人民群众中去,走到文艺创作者中间去,积极主动地融入当代群众和作家艺术家的精神世界,在面向群众、服务群众中实现文艺评论的大众化、通俗化。要不断研究人民群众精神文化生活的新特点新趋向,密切追踪人民群众审美需求的新变化新规律,从火热的现实生活中吸收和补充营养,听取人民群众对文艺创作、文艺活动的意见和建议,真正使我们的评论作品接受群众的检验。各级各类媒体要为广大基层群众开展文艺评论提供园地,多发表来自基层的评论作品,多刊登短小精悍、简洁明快的评论文章,多使用来自普通群众的质朴生动、率真中肯的评论语言。各类文艺评论组织要改进方式方法,扎实开展形式多样、内容丰富的影评、剧评、书评、乐评等活动,不断提高基层群众的鉴赏和评论水平。
第四、不断增强文艺评论的创造力、吸引力和感召力。创新是文艺评论的生命之魂、魅力之本、动力之源。要立足中国特色社会主义文艺实践,放眼世界文化发展潮流,认真研究文艺创作的新动态、文艺活动的新变化,对社会生活和人类本质始终保持深刻独到的理解把握,从广阔的创作实践中选取评论题材,从丰富的文艺现象中提炼真知灼见,用逻辑的魅力和理论的说服力打造时代的评论精品。要始终坚持与时俱进,广泛吸收借鉴社会科学和自然科学的优长,改进研究方法,提高评论水平,努力创造出能够充分表达时代审美特征的概念与范畴,创造出具有鲜明时代风貌的评论文体和语言,创造出体现中华民族深厚文化底蕴的评论风格,使我们的评论作品深入浅出、通俗流畅,让群众爱读、爱听、爱看。
第五、大力拓展文艺评论阵地。这是繁荣文艺评论的必由之路。我们必须进一步打开思路,采取切实有效的措施,搭建评论平台,拓宽传播渠道。要充分发挥报刊阵地的骨干作用。中央和省级党报要开辟版面,对重要文艺作品、文艺活动和现象进行深入评析,注意发挥好优秀文艺评论的示范和导向作用。专业文艺报刊要突出自身特点,树立品牌意识,着力提高文艺评论质量和水平,进一步增强对作家艺术家的影响力。都市生活类报刊要加大对优秀作品的宣传评介力度,注重思想内涵,提高文化品位。要加强电视文艺评论。中央电视台和有条件的省级电视台上星频道要开办文艺评论节目,精心组织、精心编排,办出质量、办出品牌。要适应现代传播发展的新特点,重视抓好网络文艺评论,鼓励和扶持一批重点文艺评论网站,支持文艺评论家开展公开、平等、善意、理性的网上评论,增强优秀文艺评论对广大网民特别是青少年的感染力和覆盖面。总之,要通过各方面的努力,为文艺评论搭建更大的展示平台,为健康说理的文艺评论提供更大的传播空间。
第六、培养造就一支高素质的文艺评论队伍。加强和改进文艺评论工作,关键在队伍,根本在人才。要加强文艺评论人才培养工作,在宣传文化系统“四个一批”人才培养工程中增加文艺评论人才的数量,着力培养中青年文艺评论领军人物。要把组织举办各种形式的文艺评论培训班制度化、经常化,充实和强化文艺评论专业教育,探索文艺界人民团体、文艺媒体、高校以及社科研究机构共同培养的新路子,努力造就一大批文学、影视、戏剧、美术、音乐、舞蹈、曲艺等各领域的评论专门人才。要进一步完善人才激励机制,对在文艺评论领域取得突出成绩的文艺评论家予以表彰奖励。有关部门要采取有效措施树立文艺评论家的威信,使优秀文艺评论家社会上受尊重、专业上有权威,并进一步提高文艺评论家的待遇,增加文艺评论的报酬。要加强行业自律和职业规范建设,倡导学术自由和社会责任的统一,倡导为文与为人的统一,秉笔直书、客观公正,以理服人、与人为善,对群众负责,对社会负责,对历史负责。各级文艺管理部门和人民团体要认真贯彻“双百”方针,尊重差异,包容多样,用民主协商、平等讨论的办法解决艺术上的问题,允许艺术探索过程中出现的偏差和失误,不求全责备,不以行政命令代替文艺评论。要多为文艺评论家办实事、办好事,充分调动他们的积极性主动性,努力形成团结融洽、生动活泼的良好局面。
近年来,我国经济社会发展日新月异,各项事业欣欣向荣,文艺发展形势很好。文艺创作积极活跃,文艺氛围融洽和谐,文艺队伍意气风发,文艺园地生机勃勃,文艺理论研究和文艺评论发生可喜变化。文艺理论建设进一步加强,马克思主义理论研究和建设工程深入推进,在关于社会主义核心价值体系建设与中国特色社会主义文艺发展等一系列重大问题的研究方面,取得积极进展。广大文艺评论工作者积极关注文艺思潮发展,紧密联系创作实际,正确把握文艺现象,认真分析文艺作品,发现和推介了一大批思想精深、艺术精湛、制作精良的优秀作品,特别是在重大节庆期间,丰富多彩的文艺评论唱响了民族精神和时代精神的主旋律。文艺评论界积极借鉴国外文艺创作与评论的有益经验,以我为主、为我所用,在文艺评论的观念、文体、载体和手段等方面,进行了多方面可贵探索,推出一批创新性成果。文艺评论自身建设逐渐加强、品位不断提高,实事求是、重在建设的评论理念逐步成为共识,心平气和、健康理性的评论态度得到尊重,观点鲜明、言之有物、说服力强的评论作品得到推崇,文坛公案和笔墨官司减少,网络恶搞和谩骂遭到抵制,科学说理的评论风气逐步形成,促进了文艺创作的繁荣。
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