摘要：目的构建反义DNA甲基化酶3b(DNMT3b)基因片断真核表达载体,为研究DNMT3b基因功能提供工具.方法根据DNMT3b基因cDNA序列中编码序列设计PCR引物,在上下游引物5′端分别添加XbaⅠ和KpnⅠ酶切位点,RT-PCR从胆管癌细胞QBC-939中获得485bp的DN断;将该片断反向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点,构建反义DNMT3b基因片断真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定.结果 PCR鉴定得到467bp特异条带,双酶切鉴定得到471bp片断和5.4kb载体片断,DNA测序说明插入片断序列正确.结论本研究构建的反义DNMT3b基因片断真核表达载体可为进一步研究DNMT3b基因功能提供实验工具.

关键词：dnmt3b 反义技术 表达载体 基因克隆 dna甲基化 

单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院; 湖北; 武汉; 430030; 贵阳医学院附属医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院; 湖北; 武汉; 430030