摘要：目的为人宫颈癌基因（HCCR）在肝癌发生、发展中的生物学效应及机制研究提供理想工具。方法培养人HepG2细胞，RT—PCR扩增出HCCR基因片段，将其连接到pCR T7 TOPO TA／NT克隆载体中，命名为pCR T7 TOPO TA／NT—HCCR。运用交叉引物PCR筛选正确连接的克隆。再用EcoR I和BamH I限制性内切酶酶切鉴定和测序验证。将其转化BL21细菌，用IPTG诱导其表达相应的蛋白质，并用Western blotting验证。结果pCR T7 TOPO TA／NT-HCCR原核表达载体构建成功。酶切鉴定和测序均与预期一致。用IPTG诱导转化此质粒后的BL21细菌，得到相应大小的蛋白质。结论pCR T7 TOPO TA／NT—HCCR原核表达载体构建成功；其可作为HCCR基因功能研究及其与肝癌相关性研究的理想工具。

关键词：基因克隆 逆转录聚合酶链反应 人类宫颈癌癌基因 肝肿瘤 肝癌 

单位：南京大学医学院附属鼓楼医院 江苏南京210008