摘要：目的以转铁蛋白受体（TfR）为靶标,从噬菌体随机七肽库淘选TfR结合肽并进行鉴定。方法经过三轮筛选,从平板上挑取分隔良好的特异性TfR结合肽单克隆,采用ELISA初步鉴定后行扩增测序及多肽合成,采用流式细胞仪检测人肝癌HepG2细胞表面TfR表达、采用免疫荧光实验及激光共聚焦实验行噬菌体与细胞共定位鉴定、采用短肽—噬菌体竞争抑制实验检测短肽对噬菌体的竞争抑制率,以正常肝脏L-O2细胞为对照。结果特异性TfR结合肽克隆最终富集度达80倍;初步检测到20个阳性克隆,其中9号克隆对TfR亲和力最高,测序表明其展示短肽序列为AHLHNRS,以碱性氨基酸为主,经HPLC检测纯度为99.91%;HepG2细胞表面TfR表达显著高于L-O2细胞;免疫荧光实验及激光共聚焦实验均显示9号噬菌体（P9）出现在HepG2细胞表面,而对照L-O2细胞无此现象;短肽与噬菌体P9对TfR的结合存在竞争关系,并且呈浓度依赖性,而野生型噬菌体M13与L-O2不存在此现象。结论本研究获得一条与TfR具有特异性结合能力的TfR结合肽;此为进一步构建肿瘤和脑源性疾病靶向治疗药物奠定了基础。

关键词：转铁蛋白受体 多肽 噬菌体展示肽库 hepg2细胞 

单位：暨南大学药学院 广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心