摘要：目的构建不同片段的NPMl与绿色荧光蛋白（EGFP）的真核融合表达质粒，检测其在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达和定位。方法RT-PCR法从人乳腺癌MDA-MB231细胞cDNA中扩增不同片段的NPM1，产物经电泳分离、切胶纯化后，分别采用XhoI和EcoRI进行酶切，然后与同样酶切后的pEGFP-C3载体进行连接反应，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，挑取克隆，提取质粒并酶切鉴定。将酶切及测序鉴定后的pEGFP/NPM1质粒采用脂质体介导后将其转入MDA-MB-231细胞中，通过Westernblot技术检测其蛋白的表达。倒置荧光显微镜观察其亚细胞定位。结果酶切鉴定和基因测序结果显示不同片段的pEGFP-NPM1融合表达质粒构建成功，并可在MDA-MB-231细胞内表达，倒置荧光显微镜下可以清晰显见融合蛋白的亚细胞定位。结论NPM1及其不同结构域的真核重组质粒构建成功，在细胞中成功表达，并可以用于分析其亚细胞定位，从而为进一步研究NPM1在乳腺癌发生发展中的作用奠定基础。

关键词：乳腺肿瘤 npm1 质粒 定位 

单位：天津医科大学附属肿瘤医院乳腺癌防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室 天津300060