摘要：目的构建线粒体靶向小清蛋白（PVALB）表达载体,探讨线粒体靶向PVALB在肝癌细胞（MHCC97H）中的表达及对线粒体内钙稳态的影响。方法以骨骼肌细胞的c DNA为模板,通过PCR法扩增得到PVALB,经酶切后与MTS、pcDNA3.1（＋）载体连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染肝癌细胞MHCC97H,用激光共聚焦显微镜检测PVALB定位及转染后MHCC97H线粒体中钙离子浓度。结果 pcDNA3.1（＋）-MTS-PVALB经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;表达的MTS-PVALB定位于线粒体;MTS-PVALB可下调线粒体内钙离子浓度。结论成功构建pcDNA3.1（＋）-MTS-PVALB线粒体靶向真核表达载体,MTSPVALB定位于MHCC97H线粒体并调节线粒体钙稳态。

关键词：肝肿瘤 小清蛋白 线粒体 钙稳态 载体构建 

单位：第四军医大学唐都医院 西安710026 国家肿瘤生物学重点实验室·第四军医大学基础部教学实验中心