摘要：目的观察食管鳞癌细胞株培养上清液对健康人外周血CD3~＋CD56~＋NKT细胞亚型、表面受体及效应分子表达的影响。方法取30例健康志愿者的外周血,用淋巴细胞分离液常规方法分离外周血单核细胞。收集食管鳞癌细胞株Eca9706、Kyse150的培养上清液,将上清液与含10%胎牛血清的RPMI1640培养基按1∶1混合以配制条件培养基。将外周血单核细胞分为对照组、Eca9706组、Kyse150组。对照组细胞仅用含IL-2、10%胎牛血清的RPMI1640培养液培养;Eca9706组、Kyse150组细胞加入IL-2刺激24 h后,分别更换条件培养基（Eca9706细胞培养上清液、Kyse150细胞培养上清液）培养48 h。收集各组细胞,选择流式细胞仪的CD3~＋CD56~＋的细胞群设计分析,分析各组CD3~＋CD56~＋NKT细胞亚型,检测CD3~＋CD56~＋NKT细胞中的表面受体（NKG2D、NKG2A、NKP30、NKP44、CD158b、CD271）及效应分子（穿孔素、颗粒酶、Ki-67）。结果 Eca9706组及Kyse150组的CD3~＋CD56~＋NKT细胞中CD4~＋CD8-NKT细胞比例高于对照组,CD4-CD8-NKT细胞比例低于对照组（P均〈0.05）。Eca9706组、Kyse150组的CD3~＋CD56~＋NKT细胞中NKG2A、CD158b表达率高于对照组,NKP44、NKP30、CD271表达率低于对照组（P均〈0.05）。Eca9706组的CD3~＋CD56~＋NKT细胞中穿孔素表达率低于对照组（P〈0.05）;Eca9706组的CD3~＋CD56~＋NKT细胞中Ki-67表达率高于对照组（P〈0.05）。结论食管鳞癌细胞株培养上清液能改变正常CD3~＋CD56~＋NKT细胞的亚型,使细胞表面活化型受体和抑制型受体表达比例失衡,并下调效应分子穿孔素的表达,使CD3~＋CD56~＋NKT细胞的免疫监视功能受损。上述变化可能是食管鳞癌细胞逃避机体免疫监视的机制之一。

关键词：食管肿瘤 食管鳞癌细胞 免疫细胞 自然杀伤t细胞 肿瘤微环境 

单位：西南医科大学附属医院; 四川泸州646000; 资阳市人民医院