摘要：为了在3L发酵罐水平上提高重组菌E.coli BL 21（DE3）/pET20b（＋）-BapulA的普鲁兰酶的表达量和胞外分泌,将嗜酸芽孢杆菌普鲁兰酶（Bacillus acidopullulyticus）在大肠杆菌中进行重组表达,并在3L发酵罐水平上对重组菌进行发酵优化,考察了发酵条件对重组酶表达的影响。重组菌发酵的最佳条件为：发酵前期菌体生长温度和pH分别为30℃和7.0,当菌体浓度OD_（600）达到50时,发酵温度降低至25℃,此时调节pH为6.2,同时开始流加乳糖[0.4g/（L·h）]进行诱导;在发酵过程中,当菌体浓度OD_（600）依次达到15,45,75时,分别加入浓度为1.5g/L的甘氨酸,当菌体OD600为105时,再加入浓度为3g/L的甘氨酸。发酵结束后普鲁兰酶的胞外酶活达659.0U/mL,最高总酶活达1 910.1U/mL,与摇瓶的初始总酶活（41.1U/mL）和胞外酶活（6.5U/mL）相比,分别提高了45.4倍和100倍。

关键词：普鲁兰酶 重组表达 发酵优化 ph 甘氨酸 

单位：江南大学食品科学与技术国家重点实验室; 江苏无锡214122; 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室; 江苏无锡214122; 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室; 江苏无锡214122