摘要：目的：构建人PKM2（M2-typepyruvate kinase）的原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达，镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白。方法：用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2，通过克隆载体pET30a（＋）构建质粒载体pET30a（＋）-PKM2。经双酶切和DNA测序证实正确后，用Mi-NTA亲和层析柱进行纯化。结果：双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符，测序结果和报道一致。经SDS—PAGE分析，纯化后的蛋白约在58KDa位，条带单一，无杂带出现。结论：成功表达纯化了PKM，融合蛋白，为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础。

关键词：pkm 2 克隆 表达 纯化 

单位：兰州大学第一临床医学院; 甘肃兰州730000; 甘肃省人民医院; 甘肃兰州730000; 兰州大学结核病研究中心; 甘肃兰州730000