摘要：利用GenBank发表的捻转血矛线虫β微管蛋白基因组DNA序列设计2对引物,建立检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性的多重PCR方法,利用该方法检测我国不同地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗性,并用生物学检测验证.结果表明,建立的多重PCR方法在抗性检测上具有很强的特异性,澳大利亚抗性虫株只有F1和F3条带,上海敏感虫株只有F2和F3片段;序列分析证实抗性虫株编码β微管蛋白第200位氨基酸的密码子为TAC,敏感虫株为TTC.并且该法具有很高的灵敏性,检测基因组DNA的最低量为50 ng.生物学检测,澳大利亚抗性虫株丙硫苯咪唑LD50达0.54 μg·ml-1,上海敏感虫株的LD50为0.0023 μg·ml-1,与多重PCR结果相符,说明多重PCR可以用于捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性的检测.利用该技术检测源于新疆石河子、伊宁,安徽五河,江苏南京、徐州等地的虫株发现,这些地理株均表现为敏感型,丙硫苯咪唑LD50在0.0023～0.0032 μg·ml-1之间,提示我国捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性尚不严重.

关键词：多重pcr检测 捻转血矛线虫 苯并咪唑类药物 抗药性 等位基因 

单位：南京农业大学动物医学院，南京210095