摘要：【目的]克隆棉花木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3全长cDNA序列，分析其在不同组织部位的表达情况并进行原核表达研究。【方法】根据棉花纤维特异表达cDNA文库分析得到的EST序列设计引物，采用RT-PCR技术克隆基因，用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析。采用半定量RT—PCR方法研究6hCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3在不同组织中的表达。构建了基因的原核表达载体，经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中并诱导表达。【结果】从发育的棉花纤维中克隆了3个COMT基因cDNAs，GhCOMT1（GenBank登录号为FJ479708）、GhCOMT2（GenBank登录号为FJ479709）和6hCOMT3（GenBank登录号为FJ848869）分别具有1101bp、1098bp、1071bp的开放阅读框，各自编码366、365和356个氨基酸。GhCOMTI、6hCOMT2和6hCOMT3在棉花各个组织中都有表达，GhCOMTI和GhCOMT2在根部的表达量最高，6hCOMT3在茎中表达量最高。SDS-PAGE电泳分析表明，3个蛋白的最佳诱导表达条件均为0．2mmol．L^-1IPTG在37℃下诱导6h。【结论】从棉花中克隆了3个木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3，为进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

关键词：棉花 基因克隆 表达分析 原核表达 

单位：新疆农业科学院核技术生物技术研究所 乌鲁木齐830091