摘要：【目的】克隆大豆蚜羧酸酯酶基因，了解该酶的分子特性，为研究大豆蚜抗药性机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术，克隆了1个大豆蚜羧酸酯酶基因的全长cDNA序列，命名为AgCarE,利用生物信息学软件及网上工具进行序列分析，以pET-21b为载体构建原核表达系统进行表达，并以甜一醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明，羧酸酯酶基因AgCarE（GenBank登录号：JF970181）全长1946bp，编码526个氨基酸。羧酸酯酶hgCarE的等电点（pI）为6．08，蛋白活性中心包括3个氨基酸残基（催化三联体）：Ser186、Glu313、His434，5个N-联糖基化位点，具备羧酸酯酶的结构特征，属羧酸酯酶家族（EC：3．1．1．-）。将该基因编码序列与pET-21b载体重组，经IPTG诱导表达HIS标签融合蛋白、SDS—PAGE分析和Western—blot检测，在大肠杆菌BL21中成功表达约59kD的hgCarE蛋白，以α-醋酸萘酯为底物，检测表达的羧酸酯酶活性为0．036mmol／100山酶液。【结论】成功克隆、表达了大豆蚜羧酸酯酶蛋白hgCarE，以α-醋酸萘酯为底物，检测表达的羧酸酯酶活性为0．036mmol／100μL酶液，有助于进一步了解羧酸酯酶的结构特征及水解作用，为设计研发新型杀虫剂提供可能。

关键词：大豆蚜 羧酸酯酶 基因克隆 活性分析 

单位：东北农业大学农学院 哈尔滨150030