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应用ihpRNA干扰技术创制高支链淀粉马铃薯材料

刘玉汇 王丽 杨宏羽 余斌 李元铭 张俊莲 王蒂 中国农业科学 2013年第18期

摘要:【目的】创造块茎高支链淀粉或纯支链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】以构建的由Patatin启动子驱动的pBIl21g-PghBI为干扰表达载体,采用农杆菌介导法转化马铃薯优良品种甘农薯2号。用PCR、Southern blotting、半定量RT—PCR和实时荧光定量PCR技术检测转基因植株,并对转基因植株的微型薯进行淀粉含量的测定。【结果】通过农杆菌介导法获得10个转基因株系。PCR和Southern杂交结果证明,目的基因已被整合到基因组中,通过半定量RT-PCR分析表明,转基因株系中GBSSI的表达均受到明显抑制,且在6个转基因株系中检测不到mRNA的表达。进一步通过re&1-timcPCR分析表明,转基因株系中GBSSI的mRNA沉默效率为66.27%-93.53%;转基因株系微型薯的淀粉含量也发生明显变化,其支链淀粉含量高达90.16%-98.84%,比对照高出10.31%-20.92%。转基因株系GBSSI的mRNA沉默效率与支链淀粉含量呈显著正相关(r=0.937,P〈0.01)。【结论】采用ihpRNAi技术可有效抑制马铃薯块茎中内源GBSSI表达,获得高支链或纯支链淀粉含量的马铃薯材料。

关键词:马铃薯高支链淀粉ihprna干扰技术颗粒结合型淀粉合成酶

单位:甘肃农业大学农学院/甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室 兰州730070 甘肃省干旱生境作物学重点实验室 兰州730070 甘肃农业大学生命科学技术学院 兰州730070 甘肃农村发展研究院 兰州730070

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