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甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-LAMP检测方法的建立

乔奇 张振臣 秦艳红 张德胜 田雨婷 王爽 王永江 中国农业科学 2013年第18期

摘要:【目的】基于逆转录环介导等温扩增技术(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)建立甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(WestAfrican,wA)的可视化检测方法。【方法】针对SPCSV西非株系(SPCSV-WA)的卯核苷酸序列设计4条5l物,以感染SPCSV-WA甘薯叶片总RNA为模板,进行一步法RT-LAMP,在65℃条件下反应1h。扩增产物利用琼脂糖电泳分析和SYBRgreenI荧光染料显色判断结果,同时对扩增产物的电泳条带进行基因克隆和测序鉴定。利用常规RT-PCR和建立的RT-LAMP方法对14份甘薯样品进行SPCSV-WA检测。比较2种方法的检测结果。【结果】建立的LAMP方法可特异地对SPCSV-WA进行检测,且最低可检测出10^1拷贝/DL的模板。RT-LAMP产物的克隆测序表明,感染SPCSV-WA甘薯样品的RT-LAMP产物为SPCSV-WA卯基因序列。14份田间甘薯样品检测表明,RT-LAMP与RT—PCR方法检测结果完全一致。【结论]建立的SPCSV-WART-LAMP可视化检测方法,是简便、可靠的SPCSV-WA检测方法。

关键词:甘薯甘薯褪绿矮化病毒西非株系逆转录环介导等温扩增技术检测

单位:河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业部华北南部作物有害生物综合治理重点实验室 郑州I450002

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