摘要：【目的】WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过对大豆WRKY转录因子基因GmWRKY148的克隆及在大豆发状根中过表达后对疫霉根腐病抗性的分析，探究大豆与大豆疫霉菌互作的作用机理。【方法】以拟南芥的AtWRKY44序列为探针，利用同源克隆的方法在大豆Williams 82的根部组织中得到其同源基因Glyma.14G199800，命名为GmWRKY148。对GmWRKY148蛋白进行系统进化树分析；利用qRT-PCR方法分析该基因在大豆的根、茎、叶、子叶和接种大豆疫霉菌不同时间点的转录水平；利用双酶切的方法将GmWRKY148完整的CDS序列连接到植物过表达载体pBinGFP2中，利用基因枪法将重组质粒转化到洋葱表皮细胞中，进行亚细胞定位分析。利用发根农杆菌K599介导的遗传转化体系，经过GFP荧光筛选和qRT-PCR检测，获得大豆过表达GmWRKY148的阳性发状根（OE-GmWRKY148）和转入pBinGFP2空载体（EV）的阴性对照发状根。对过表达GmWRKY148发状根和阴性对照发状根接种大豆疫霉菌，统计病斑长度、疫霉积累量和卵孢子萌发情况。【结果】GmWRKY148的CDS序列全长为999 bp，编码332个氨基酸，等电点为7.61。系统进化分析发现，GmWRKY148与菜豆(Phaseolus vulgaris)、蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）的WRKY转录因子亲缘关系十分相近，且与菜豆的亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示，GmWRKY148定位在细胞核中。组织表达分析显示，GmWRKY148在根中的表达量最高，在茎和叶中次之，在子叶中最低。荧光定量PCR结果表明，接种大豆疫霉菌P6497后，在感病品种Williams和抗病品种Williams 82（含有Rps1k）中，GmWRKY148受诱导逐渐上调表达，在侵染24 h后表达水平均达到最高，但在Williams 82中的上调倍数更高。对过表达GmWRKY148和转空载体的大豆阳性发状根分别接种大豆疫霉菌P6497的菌丝块，比较接种24 h后的病斑长度和疫霉积�

关键词：大豆 gmwrky148 大豆疫霉根腐病 抗性 

单位：南京农业大学农学院/国家大豆改良中心/农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室/作物遗传与种质创新国家重点实验室; 南京210095