摘要:目的探讨HIV-l中国株CN54 Gag P55和P24重组蛋白的高效表达并纯化,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件.方法分别将CN54 Gag P55和P24基因克隆至pBV220和pThioHisC载体,构建非融合表达载体;将重组质粒转化大肠杆菌BL21 codonplus-RIL,对工程菌进行诱导表达.Western-B1ot检测目的蛋白,用DEAE-Separose FF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白;纯化的P55和P24抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测.结果P55以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%,P24实现了可溶性表达,表达量占总菌体总蛋白的40%;纯化后P55纯度达到80%,P24纯度超过90%.Western-Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性.结论HIV-1 CN54 Gag P55和P24抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性,可用于HIV基础研究和临床检验.
单位:中国疾病预防控制中心; 性病艾滋病预防控制中心; 100050; 北京; 中国协和医科大学; 中国医学科学院输血研究所; 中国疾病预防控制中心; 性病艾滋病预防控制中心; 100050; 北京; 中国协和医科大学; 中国医学科学院输血研究所
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