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促进成骨与抑制成脂基因共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达

蒋林栋; 李劲峰; 马源; 李成; 李月白; 王义生 中国实用医刊 2016年第24期

摘要:目的:检测降钙素基因相关肽基因(CGRP)和沉默过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)共转染NIH3T3成纤维细胞中的表达。方法培养 NIH3T3成纤维细胞,收集细胞随机分为五组,正常组:正常培养细胞,不做特殊处理,作为正常对照;空载体组:仅用空载体 pGFP-V-RS 质粒转染细胞,作为阴性对照组;CGRP 组:用重组载体 pGFP-V-RS-exCGRP 质粒转染细胞;siPPARγ组:用重组载体 pGFP-V-RS-siPPARγ质粒转染细胞;双基因组:用重组双基因载体 pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP 质粒转染细胞。电转染成功后,继续培养细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测各组细胞内 PPARγ、CGRP mRNA 与蛋白的表达。结果双基因组中 CGRP 基因呈高表达,明显高于正常组、空载体组、siPPARγ组,差异均有统计学意义(P <0.05);与 CGRP 组中 CGRP 基因表达量相近,差异未见统计学意义(P >0.05)。双基因组细胞中 PPARγ基因呈低表达,明显低于正常组、空载体组、CGRP 组,差异均有统计学意义(P <0.05);与 siPPARγ组细胞中 PPARγ基因表达量相似,差异未见统计学意义(P >0.05)。结论促进成骨基因和抑制成脂基因共转染 NIH3T3成纤维细胞,能够上调细胞中 CGRP 基因表达,同时下调 PPARγ基因表达。

关键词:基因转染降钙素基因相关肽nih3t3成纤维细胞

单位:郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室; 450052; 郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学系

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