摘要：目的 构建和表达含信号肽的结核分枝杆菌8．4（MS）／人白细胞介素12（hIL-12）嵌合基因，并研究嵌合基因疫苗的免疫原性。方法克隆MS／hIL12嵌合基因，导入真核表达载体pCI-neo，构建成MS／hIL12嵌合基因真核表达质粒，用限制性内切酶消化、聚合酶链反应（PCR）及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定；重组嵌合质粒转染COS07细胞后，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）鉴定MS／hIL12嵌合基因的表达情况。将MS／hIL-12嵌合基因疫苗免疫C57BL／6N小鼠，脾细胞培养上清检测细胞因子水平；并按效、靶比例分别为100：1、50：1、10：1进行细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤检测。结果MS／hIL12嵌合基因重组真核表达质粒构建成功；转染COS07细胞后，MS／hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。MS／hIL12嵌合基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）含量分别为（1521±48）ng／L和（755±41）ng／L，MS基因疫苗组分别为（820±50）ng／L和（297±31）ng／L，BCG组分别为（1487±40）ng／L和（767±50）ng／L，空载体组分别为（121±16）ng／L和（62±10）ng／L，PBS组分别为（48±16）ng／L和（32±17）ng／L，上述结果显示MS／hIL-12嵌合基因疫苗组IFN-γ、IL-2分泌量增加，明显高于MS基因疫苗组及对照组（P〈0．01），与BCG组相当（P〉0．05）；BCG组免疫小鼠脾细胞培养上清中白细胞介素4（IL-4）的含量为（91±11）ng／L，明显高于其他各组（P〈0．01）。效靶比为100：1、50：1、10：1时，MS／hIL12嵌合基因疫苗组的CTL活性分别为77．5％、51．2％、30．3％，MS基因疫苗组分别为56．2％、37．8％、11．5％，BCG组分别为28．9％、21．4％、9．8％，MS／hIL-12嵌合基因疫苗组的CTL活性高于MS基因疫苗组、BCG组、空载体组和PBS组（P〈0．01）。结论hIL-1

关键词：分枝杆菌 结核 疫苗 合成 免疫原性 

单位：泸州医学院附属医院感染病科; 646000; 江西省南昌市血站; 重庆医科大学第二临床学院感染科; 军事医学科学院野战输血研究所一室