摘要:目的观察RNA干扰介导的核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)激酶(IKK)α和γ基因沉默对核转录因子-κB(NF—κB)信号通路的调节作用,进一步阐明其基因调控机制。方法设计IKKα及IKKγ靶向的小分子干扰RNA(siRNA),合成互补的寡核苷酸链,转染到RAW264.7小鼠巨噬细胞。观察经脂多糖(LPS)刺激后NF-κB的活化、IKKα及IKKγ基因表达的变化、NF—κB p65及p50核移位的变化以及前体蛋白NF—κB p105的表达情况。结果IKKα及IKKγ基因沉默后,可导致IKKα及IKKγ基因表达出现明显下调,同时NF-κBp65及p50的核移位受到抑制,胞质、胞核中NF-κB p65、p50及p105的表达显著下调,而且能抑制NF—κBp65、p50及p105蛋白的核移位。结论IKKα及IKKγ两种蛋白激酶参与NF—κB信号通路的调节,不仅能分别在抑制蛋白的泛肽化、组蛋白磷酸化等环节发挥作用,而且还能够通过相互之间的协同作用,弥补其中某种蛋白受到过度抑制时所引起的炎症信号通路的功能障碍。
关键词:基因沉默 rna干扰 脂多糖 巨噬细胞
单位:大连医科大学附属第一医院普外科 辽宁116011 大连医科大学细胞生物学教研室 大连铁路卫生学校生理教研室
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