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严重烫伤合并铜绿假单胞菌脓毒症家兔外周血淋巴细胞蛋白质组学的研究

曾纪章 张丕红 李莉莉 任利成 梁鹏飞 黄晓元 中华危重病急救医学 2009年第08期

摘要:目的研究烫伤脓毒症时外周血淋巴细胞蛋白质组的变化特点。方法24只雄性成年家兔被随机分为对照组、烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组,每组6只。采用30%总体表面积(TBSA)I度烫伤模型,烫伤后24h经耳缘静脉注射铜绿假单胞菌悬液(ATCC27853,浓度6×10^12cfu/L)1ml/kg制备烫伤脓毒症模型;对照组用37℃温水进行假烫伤。烫伤组于伤后24h、烫伤脓毒症组于注射菌液后2h和6h取颈动脉血分离淋巴细胞,裂解细胞,提取总蛋白,用双向凝胶电泳分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,扫描、分析图像并筛选差异蛋白质点(判断差异的标准为平均表达量相差超过3倍,由本课题组设定)。应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析方法得到肽质量指纹图谱,利用Mascot软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果对照组、烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组平均蛋白质点数分别为1051±21、1026±30、1078±36、1065±31,平均匹配率分别为91%、89%、92%、94%。烫伤脓毒症2h与6h组间各蛋白质点表达量无差异;与对照组比较,烫伤组、烫伤脓毒症2h和6h组共筛选出19个差异蛋白质点,得到鉴定的有12个,包括11种蛋白质,即Cofilin、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶胞溶质蛋白A、泛素、核苷二磷酸激酶、谷氨酸脱氢酶、硒结合蛋白I、β-肌动蛋白、过氧化物氧化还原素6、膜联蛋白I、肌动蛋白-3、细胞视黄酸结合蛋白。结论严重烫伤并脓毒症时外周血淋巴细胞蛋白质组发生变化,表达改变并经鉴定的11种蛋白质功能涉及蛋白质折叠、装配、运输、降解,以及胞内信号传递、炎症、免疫、能量代谢、细胞增殖、分化、凋亡等,这些蛋白质与烧伤后脓毒症的发生有关。

关键词:烧伤脓毒症铜绿假单胞菌淋巴细胞

单位:中南大学湘雅医院烧伤整形外科 湖南长沙410008

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