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血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

吴艳 陈淼 吴双 王洪敏 钱明江 王宇辉 傅小云 中华危重病急救医学 2011年第11期

摘要:目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对过氧化氢(H2O2)氧化损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡以及线粒体跨膜电位(MTMP)的影响。方法将24只健康雄性SD大鼠腹腔注射麻醉处死后取肺,分离纯化AECⅡ接种于培养板,原代培养24h后等量分为正常对照组、H2O2损伤组、HO-1保护组、HO1抑制组4组。采用0.5mmol/i。H2O2刺激AECⅡ2.5h建立细胞氧化损伤模型。制模后用0.2μmol/LHO-1或20tlmol/L锌原卟啉Ⅸ处理给予保护或抑制。处理2.5h后用荧光显微镜观察细胞的形态学变化;分别于处理0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h5个时间点用流式细胞仪检测细胞凋亡率及MTMP去极化比例的变化。结果荧光显微镜下观察:H2O2损伤组可见大量呈绿色(凋亡早期)、红色(凋亡中晚期)荧光的凋亡细胞;HO1保护组所见绿色或红色荧光细胞明显减少;HO-1抑制组与H2O2损伤组镜下所见相似。流式细胞仪检测结果显示:与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率增加,且随H2O2作用时间延长逐渐增加,2.5h达峰值[0.5h:(30.27±0.74)Yo比(3.76±0.81)%,2.5h:(40.46±0.91)%比(22.74±0.60)%,均P〈0.053,MTMP去极化比例明显降低(O.99±0.21比1.91±0.16,P%0.05);与H2O2损伤组比较,HO1保护组AECⅡ细胞凋亡率明显降低[0.5h:(5.99±0.60)%比(30.27±0.74)%,2.5h:(22,69±1.69)%比(40.46±0,91)%,均P〈0.053,MTMP去极化比例明显升高(2.02±0.12比0.99±0.21,P〈0.05);与HO-1保护组比较,HO-1抑制组细胞凋亡率明显增加[0.5h:(30.73±1.08)%比(5.99±0.60)%,2.5h:(41.38±0.57)%比(22.69±1.69)%,均P〈0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.98±0.09比2.02±0.12,P〈0.05)。结论HO-1可保护AECⅡ细胞完整性,降低细胞凋亡率并且稳定MTM

关键词:凋亡线粒体跨膜电位大鼠

单位:遵义医学院附属医院ICU 贵州563000 河北联合大学附属医院内分泌肾内科 山东省微山县人民医院麻醉科

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