摘要：目的：通过腺病毒过表达微小RNA-21-5p（miR-21-5p）后转染Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ），观察其对过氧化氢（H2O2）诱导的AECⅡ细胞凋亡的影响，并探索其抗凋亡的分子机制。方法将传代培养的大鼠AECⅡ随机均分为4组：正常对照组（生理盐水）、H2O2损伤组（0.5 mmol/L H2O2）、miR-21-5p过表达组（miR-21-5p腺病毒＋0.5 mmol/L H2O2）、 miR-21-5p阴性转染组（空腺病毒＋0.5 mmol/L H2O2）。采用透射电镜及流式细胞仪分别检测细胞凋亡形态及早期凋亡率；取转染效率最高的时间点（6、12、24、48 h），采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测AECⅡ内miR-21-5p表达水平，蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞内Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的蛋白表达。结果① AECⅡ鉴定：荧光显微镜下可见AECⅡ的特征性结构（微绒毛及嗜锇性板层小体）。②细胞凋亡形态：透射电镜下可见AECⅡ胞质回缩，染色质凝聚、边聚，细胞表面微绒毛稀少，嗜锇性板层小体排空。③ AECⅡ内miR-21-5p表达：48 h miR-21-5p腺病毒转染效率最高。miR-21-5p过表达组AECⅡ细胞中miR-21-5p表达量明显高于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组（A值：1.54±0.02比1.02±0.02、0.56±0.03、0.58±0.02，均P＜0.05）。④细胞凋亡率：与正常对照组比较，H2O2损伤组、miR-21-5p阴性转染组和miR-21-5p过表达组细胞凋亡率均随损伤时间的延长逐渐升高。除损伤6 h外，miR-21-5p过表达组细胞凋亡率明显低于H2O2损伤组和miR-21-5p阴性转染组〔12 h：（10.73±2.80）%比（16.26±0.59）%、（16.04±0.70）%，24 h：（16.00±3.44）%比（23.29±2.78）%、（23.58±2.31）%，48 h：（31.30±3.55）%比（50.53±2.17）%、（49.41±1.97）%，均P＜0.05〕；miR-21-5p阴性转染组与H2O2损伤组各时间点比较差异均无统计学意义。⑤蛋白表达：miR-21-5p过表达组AEC�

关键词：肺泡上皮细胞 凋亡 微小rna 分子机制 

单位：遵义医学院附属医院重症医学科 贵州遵义563003