摘要：目的：探讨慢病毒介导的热休克蛋白70（HSP70）基因表达对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤（PC12）细胞内质网钙稳态的影响及钙通道的调节机制。方法取对数生长期的PC12细胞，分为重组慢病毒感染组〔感染含HSP70及绿色荧光蛋白（GFP）基因的慢病毒〕、慢病毒对照组（感染含GFP但不含HSP70基因的慢病毒）及未感染组。采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测PC12细胞经缺血/缺氧处理4、8、12、24h后的细胞活性，以选取最佳缺血/缺氧时间。采用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测缺血/缺氧8h时HSP70、肌质/内质网Ca2＋-ATP酶亚型（SERCA2a、SERCA2b）、兰尼碱受体2（RyR2）、三磷酸肌醇受体1（IP3R1）的mRNA转录水平；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测缺血/缺氧8h时HSP70、SERCA、IP3R的蛋白表达水平；采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）及游离钙离子（[Ca2＋]i）水平。结果随着缺血/缺氧时间延长，各组细胞活性呈先增强后减弱的趋势，均于8h时达峰值。缺血/缺氧8h时，重组慢病毒感染组细胞活性较未感染组和慢病毒对照组均明显升高〔A值（×10-2）：20.3±2.2比14.1±2.1、15.0±1.6，均P＜0.01〕，HSP70和SERCA的mRNA及蛋白表达均明显上调〔HSP70mRNA（2-ΔΔCt）为0.785±0.018比0.428±0.019、0.423±0.023，HSP70蛋白（灰度值）为2.72±0.20比1.56±0.36、1.63±0.41，SERCA2amRNA（2-ΔΔCt）为0.971±0.037比0.367±0.014、0.347±0.012，SERCA2bmRNA（2-ΔΔCt）为8.869±0.162比3.015±0.091、2.941±0.091，SERCA蛋白（灰度值）为2.84±0.18比1.48±0.26、1.52±0.29〕，IP3R2的mRNA及蛋白表达均明显下调〔IP3R2mRNA（2-ΔΔCt）为0.183±0.020比0.439±0.020、0.433±0.040，IP3R2蛋白（灰度值）为1.15±0.12比1.91±0.20、1.83±0.19〕，差异均有统计学意义（均P＜0.01），而RyR1mRNA表达差异无统计学意义〔2-ΔΔCt（×10-3）：1.97±0.63比2.02±0.22、2.01

关键词：热休克蛋白70 pci2细胞 内质网钙通道 

单位：青岛大学医学院附属青岛市立医院东院重症医学科 山东青岛266071 青岛大学医学院 山东青岛266071