摘要：目的探讨脂多糖（LPS）诱导人THP-1巨噬细胞自噬过程中微小RNA-101和微小RNA-125a-5p（miR-101、miR-125a-5p）的调控作用。方法体外培养人白血病单核细胞THP-1，用佛波醇（PMA，50μg/L）诱导THP-1细胞48h分化成巨噬细胞，以0、250、500、1000μg/L梯度LPS刺激细胞12h，以转染试剂脂质体Lipofectamine RNAiMAX介导miRNA模拟物（miR—mimic）转染细胞，荧光显微镜下观察miRNA的转染效率。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的释放量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞内自噬相关蛋白ATG4D、Beclin1、LC3Ⅱ的蛋白表达；采用定量反转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）检测miR-101和miR-125a-5p的表达。结果①250、500、1000μg/L LPS刺激THP-1巨噬细胞12h后，TNF-α和MCP-1释放量较未用LPS刺激细胞显著升高[TNF—α（ng／L）：1336．1±18．5、1340．6±24．8、1364．5±14．9比47．6±4．4，MCP-1（ng／L）：996．3±51．3、934．6±84．3、974．2±69．5比21．3±6．5，均P〈0．01]，但3个剂量组间无统计学差异。250、500、1000μg／L LPS刺激细胞12h后，细胞内ATG4D、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达均较未用LPS刺激细胞明显上调（ATG4D的t值分别为8．103、38．410、52．020，P值分别为0．015、0．001、〈0．001；Beclin1的f值分别为3．026、5．328、3．482，P值分别为0．047、0．034、0．037；LC3Ⅱ的t值分别为3．836、6．200、4．665，P值分别为0．018、0．003、0．010），以500μg/L LPS的效果最为明显。用500峨几LPS刺激细胞12h后，细胞内miR-101、miR-125a-5p的表达均较未用LPS刺激细胞显著下调[miR-101（2^-△△Ct）：0．68±0．08比1．95±0．26，t=8．047，P=0．001；miR-125a-5p（2^-△△Ct）：0．23±0．06比1．69±0．42，t=5．975，P=0．004]。②荧光显微镜下显示miRNA转染效率较高。Western Blot结果显示�

关键词：微小rna 自噬 巨噬细胞 脂多糖 

单位：广州医科大学附属第二医院急诊科 广东广州510260 广州医科大学附属第二医院重症医学科 广东广州510260