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转化生长因子-β/Smad信号通路对 急性肺损伤小鼠免疫平衡的影响

孙宏; 刘显东; 吕迪宇; 包晓玮; 白建文; 唐伦先 中华危重病急救医学 2016年第11期

摘要:目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路对急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡的影响及机制。方法按随机数字表法将60只雄性C57BL/6小鼠分为3组,每组20只。白细胞介素-17(IL-17)预处理组先经腹腔注射抗小鼠IL-17单克隆抗体200μg,ALI模型组则注射200μg同型对照抗体IgG2a;24h后两组均经气管内注入脂多糖(LPS)4mg/kg〔溶于30μL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕诱导ALI小鼠模型,对照组经气管内滴注30μLPBS。各组于制模后24h处死小鼠,取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)。光镜下观察肺组织病理学改变;测定肺湿/干重(W/D)比值和BALF中蛋白含量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织匀浆中IL-6、IL-10、IL-17A和TGF-β1水平;流式细胞仪检测肺组织中Treg和Th17细胞量;实时定量聚合酶链反应(PCR)检测肺组织维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)、TGF-β1、叉头蛋白P3(Foxp3)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测肺组织磷酸化Smad2/3、Smad7(p-Smad2/3、p-Smad7)表达。结果与对照组比较,ALI模型组肺组织可见大量炎性细胞浸润,伴有肺泡壁间隔增厚、充血水肿/塌陷和点状出血;肺W/D比值、BALF中蛋白含量及肺组织IL-6、IL-17A、TGF-β1水平、Th17/Treg细胞比例、ROR-γt、TGF-β1、Foxp3、Smad2、Smad3的mRNA表达明显升高,Smad7mRNA表达明显下降。与ALI模型组比较,IL-17预处理组镜下显示,肺损伤明显减轻;肺W/D比值明显减小(5.84±0.65比8.27±1.32),BALF中蛋白含量明显降低(g/L:0.09±0.02比0.18±0.05);肺组织IL-6(pg/mg:465±105比1098±145)、IL-17A(pg/mg:32±12比876±178)、TGF-β1(pg/mg:45±10比96±26)明显下降;肺组织Th17细胞量〔(6.78±0.35)%比(11.32±1.25)%〕和Th17/Treg比值(1.24±0.29比1.98±0.21)明显降低;肺�

关键词:急性肺损伤辅助性t细胞17调节性t细胞

单位:同济大学附属东方医院急诊内科; 上海200120

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